Shpjegimi i termave bazë të biologjisë molekulare
1. cDNA dhe cccDNA: cDNA është një ADN me dy vargje e sintetizuar nga transkriptaza e kundërt nga mARN;cccDNA është një ADN rrethore e mbyllur me dy vargje plazmide e lirë nga kromozomi.
2. Njësia standarde e palosjes: njësia e strukturës dytësore të proteinave α-spiralja dhe fleta β mund të formojnë blloqe strukturore me rregullime të veçanta gjeometrike përmes polipeptideve të ndryshme lidhëse.Ky lloj i palosjes së përcaktuar zakonisht quhet strukturë super sekondare.Pothuajse të gjitha strukturat terciare mund të përshkruhen nga këto lloje të palosshme, madje edhe llojet e tyre të kombinuara, kështu që ato quhen edhe njësi standarde të palosjes.
3. CAP: proteina e receptorit të adenozinës monofosfat ciklik (cAMP) CRP (proteina e receptorit cAMP), kompleksi i formuar pas kombinimit të cAMP dhe CRP quhet proteina aktivizuese CAP (proteina e aktivizuar cAMP)
4. Sekuenca palindromike: Sekuenca e kundërt plotësuese e një segmenti të një fragmenti të ADN-së, shpesh një vend enzimë kufizuese.
5. micRNA: ARN ndërhyrëse komplementare ose ARN antisens, e cila është komplementare me sekuencën e mARN-së dhe mund të pengojë përkthimin e mARN-së.
6. Ribozima: ARN me aktivitet katalitik, e cila luan rol autokatalitik në procesin e bashkimit të ARN-së.
7. Motivi: Ekzistojnë disa rajone lokale me formë dhe topologji të ngjashme tre-dimensionale në strukturën hapësinore të molekulave të proteinave
8. Peptidi i sinjalit: një peptid me 15-36 mbetje aminoacide në terminalin N gjatë sintezës së proteinave, i cili drejton transmembranën e proteinës.
9. Atenuator: Një sekuencë nukleotide midis një rajoni operator dhe një gjeni strukturor që përfundon transkriptimin.
10. Pika Magjike: Kur bakteret rriten dhe hasin një mungesë të plotë të aminoacideve, bakteret do të prodhojnë një përgjigje urgjente për të ndaluar shprehjen e të gjitha gjeneve.Sinjalet që gjenerojnë këtë përgjigje emergjente janë tetrafosfati i guanozinës (ppGpp) dhe guanozina pentafosfati (pppGpp).Roli i PpGpp dhe pppGpp nuk është vetëm një ose disa operone, por prek një numër të madh të tyre, ndaj quhen superrregullatorë ose pika magjike.
11. Elementi promotor në rrjedhën e sipërme: i referohet sekuencës së ADN-së që luan një rol rregullues në aktivitetin e promotorit, si TATA në rajonin -10, TGACA në rajonin -35, përmirësuesit dhe zbutësit.
12. Sonda e ADN-së: një segment i etiketuar i ADN-së me një sekuencë të njohur, i cili përdoret gjerësisht për të zbuluar sekuenca të panjohura dhe për të ekzaminuar gjenet e synuara.
13. Sekuenca SD: Është sekuenca lidhëse e ribozomit dhe mARN, e cila rregullon përkthimin.
14. Antitrupi monoklonal: Një antitrup që vepron vetëm kundër një përcaktuesi të vetëm antigjenik.
15. Kozmidi: Është një vektor ekzogjen i ADN-së i ndërtuar artificialisht që ruan rajonet COS në të dy skajet e fagut dhe është i lidhur me plazmidin.
16. Ekzaminimi i njollave blu-bardhë: Gjeni LacZ (që kodon β-galaktozidazën), enzima mund të dekompozojë substratin kromogjen X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indole-β-D-galaktozid) për të prodhuar blu, duke e bërë kështu shtamin blu.Kur futet ADN-ja ekzogjene, gjeni LacZ nuk mund të shprehet dhe soji është i bardhë, në mënyrë që të ekzaminohen bakteret rekombinante.Ky quhet shqyrtimi blu-bardhë.
17. Elementi me veprim cis: Një sekuencë specifike bazash në ADN që rregullon shprehjen e gjeneve.
18. Enzima Klenow: Fragment i madh i ADN polimerazës I, përveç që aktiviteti 5' 3' ekzonukleaza hiqet nga holoenzima e ADN polimerazës I.
19. PCR e ankoruar: përdoret për të amplifikuar ADN-në e interesit me një sekuencë të njohur në njërin skaj.Një bisht poli-dG iu shtua njërit skaj të sekuencës së panjohur dhe më pas poli-dC dhe sekuenca e njohur u përdorën si primerë për amplifikimin e PCR.
20. Proteina e shkrirjes: Gjeni i proteinës eukariote është i lidhur me gjenin ekzogjen, dhe proteina e përbërë nga përkthimi i proteinës së gjenit origjinal dhe proteinës ekzogjene shprehet në të njëjtën kohë.
Terma të tjerë të biologjisë molekulare
1. Harta fizike e ADN-së është rendi në të cilin janë renditur fragmentet (të tretur nga endonukleaza e kufizuar) të molekulës së ADN-së.
2. Shkëputja e RNazës ndahet në dy lloje (autokatalizë) dhe (heterokatalizë).
3. Ekzistojnë tre faktorë inicues në prokariotët janë (IF-1), (IF-2) dhe (IF-3).
4. Proteinat transmembranore kërkojnë udhëzim (peptide sinjalizuese), dhe roli i kaperoneve proteinike është (ndihmon në palosjen e zinxhirit peptid në konformimin vendas të proteinës).
5. Elementet në promotorë në përgjithësi mund të ndahen në dy lloje: (elementët promotor bërthamë) dhe (elementet promotor në rrjedhën e sipërme).
6. Përmbajtja kërkimore e biologjisë molekulare kryesisht përfshin tri pjesë: (biologjia molekulare strukturore), (shprehja dhe rregullimi i gjeneve) dhe (teknologjia e rikombinimit të ADN-së).
7. Dy eksperimentet kryesore që tregojnë se ADN-ja është materiali gjenetik janë (infeksioni me pneumokok te minjtë) dhe (infeksioni i fagut T2 i Escherichia coli).potencial).
8. Ekzistojnë dy dallime kryesore midis hnARN-së dhe mARN-së: (hnARN bashkohet në procesin e shndërrimit në mARN), (fundi 5' i mARN-së shtohet me një kapak m7pGppp dhe ka një poliadenilim shtesë në skajin 3' të bishtit të acidit mRNA (polyA).
9. Përparësitë e formës me shumë nën-njësi të proteinës janë (nënnjësia është një metodë ekonomike për shfrytëzimin e ADN-së), (mund të zvogëlojë ndikimin e gabimeve të rastësishme në sintezën e proteinave në aktivitetin e proteinave), (aktiviteti mund të jetë me shumë efikasitet dhe hapet dhe mbyllet me shpejtësi).
10. Përmbajtja kryesore e mekanizmit të palosjes së proteinave, teoria e bërthamimit të parë përfshin (bërthamëzimin), (pasurimin strukturor), (rirregullimin përfundimtar).
11. Galaktoza ka një efekt të dyfishtë mbi bakteret;nga njëra anë (mund të përdoret si burim karboni për rritjen e qelizave);nga ana tjetër (është gjithashtu një përbërës i murit qelizor).Prandaj, një promotor S2 i pavarur nga cAMP-CRP nevojitet për sintezën e përhershme në nivelin e sfondit;në të njëjtën kohë, nevojitet një promotor S1 i varur nga cAMP-CRP për të rregulluar sintezën e nivelit të lartë.Transkriptimi fillon nga (S2) me G dhe nga (S1) pa G.
12. Teknologjia e ADN-së rekombinante njihet edhe si (klonimi i gjeneve) ose (klonimi molekular).Qëllimi përfundimtar është (transferimi i ADN-së së informacionit gjenetik në një organizëm në një organizëm tjetër).Një eksperiment tipik i rikombinimit të ADN-së zakonisht përfshin hapat e mëposhtëm: (1) Ekstraktoni gjenin e synuar (ose gjenin ekzogjen) të organizmit dhurues dhe lidhni atë në mënyrë enzimatike me një molekulë tjetër të ADN-së (vektor klonimi) për të formuar një molekulë të re rekombinante të ADN-së.② Molekula rekombinante e ADN-së transferohet në qelizën marrëse dhe përsëritet në qelizën marrëse.Ky proces quhet transformim.③ Ekzaminoni dhe identifikoni ato qeliza marrëse që kanë absorbuar ADN-në rekombinante.④Kultivoni qelizat që përmbajnë ADN rekombinante në sasi të mëdha për të zbuluar nëse gjeni i ndihmës së huaj është i shprehur.
13. Ekzistojnë dy lloje të riprodhimit të plazmideve: ato që kontrollohen rreptësisht nga sinteza e proteinave të qelizës bujtëse quhen (plazmide të ngushta), dhe ato që nuk kontrollohen rreptësisht nga sinteza e proteinave të qelizës bujtëse quhen (plazmide të relaksuar).
14. Sistemi i reagimit PCR duhet të ketë këto kushte: a.Primerët e ADN-së (rreth 20 baza) me sekuenca plotësuese në çdo skaj të dy vargjeve të gjenit të synuar që do të ndahen.b.Enzimat me qëndrueshmëri termike si: TagDNA polimeraza.c, dNTPd, sekuenca e ADN-së me interes si shabllon
15. Procesi bazë i reaksionit të PCR përfshin tri faza: (denaturimi), (pjekja) dhe (zgjatja).
16. Procesi bazë i kafshëve transgjenike zakonisht përfshin: ①Futjen e gjenit të huaj të klonuar në bërthamën e një veze të fekonduar ose qelizës burimore embrionale;②Transplantimi i vezës së fekonduar ose qelizës burimore embrionale në mitrën e femrës;③Zhvillimi dhe rritja e plotë embrionale Për pasardhësit me gjene të huaja;④ Përdorni këto kafshë që mund të prodhojnë proteina të huaja si kafshë shumuese për të rritur linja të reja homozigote.
17. Linjat qelizore të hibridomës krijohen nga hibridizimi i qelizave (shpretkë B) me qelizat (mielomë), dhe meqenëse (qelizat e shpretkës) mund të përdorin hipoksantinën dhe (qelizat e kockave) të ofrojnë funksione të ndarjes qelizore, ato mund të rriten në mjedisin HAT.rriten.
18. Me thellimin e hulumtimeve, gjenerata e parë e antitrupave quhet (antitrupa poliklonalë), gjenerata e dytë (antitrupa monoklonale), dhe gjenerata e tretë (antitrupat e inxhinierisë gjenetike).
19. Aktualisht, inxhinieria gjenetike e viruseve të insekteve është fokusuar kryesisht në bakulovirus, i cili manifestohet në futjen e (gjenit toksina ekzogjen);(gjenet që prishin ciklin normal të jetës së insekteve);(modifikimi i gjeneve të virusit).
20. Faktorët e proteinave trans-veprues që korrespondojnë me elementët e zakonshëm TATA, GC dhe CAAT në promotorin e ARN polimerazës II të gjitarëve janë përkatësisht (TFIID), (SP-1) dhe (CTF/NF1).
njezet e nje.Faktorët bazë të transkriptimit të ARN polimerazës Ⅱ janë, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, dhe sekuenca e tyre lidhëse është: (D, A, B, E).Ku funksioni i TFII-D është (i detyrueshëm për kutinë TATA).
njëzet e dy.Shumica e faktorëve të transkriptimit që lidhen me ADN-në punojnë në formën e dimerëve.Domenet funksionale të faktorëve të transkriptimit që lidhen me ADN-në janë zakonisht si vijon (helix-turn-helix), (motivi i gishtit zink), motivi i zinxhirit (bazik-leucine).
njëzet e tre.Ekzistojnë tre lloje të mënyrave të ndarjes së endonukleazës kufizuese: (prerë në anën 5' të boshtit të simetrisë për të gjeneruar skajet ngjitëse 5'), (prerë në anën 3' të boshtit të simetrisë për të gjeneruar skaje ngjitëse 3' (prerë në boshtin e simetrisë për të gjeneruar segmente të sheshta) ).
njezet e kater.ADN-ja e plazmidës ka tre konfigurime të ndryshme: (konfigurimi SC), (konfigurimi oc), (konfigurimi L).E para në elektroforezë është (konfigurimi SC).
25. Sistemet ekzogjene të shprehjes së gjeneve, kryesisht (Escherichia coli), (Maja), (Insekti) dhe (Tabela e qelizave të gjitarëve).
26. Metodat e përdorura zakonisht për kafshët transgjenike janë: (metoda e infeksionit retroviral), (metoda e mikroinjektimit të ADN-së), (metoda e qelizave staminale embrionale).
Aplikimi Biologjia molekulare
1. Emërtoni funksionet e më shumë se 5 ARN-ve?
Transferimi i ARN-së tARN Transferimi i aminoacideve të ribozomës ARN i ribozomit RARN Ribozomi përbën ARN-në e dërguar të ARN-së Shabllon për sintezën e proteinave ARN heterogjene ARN bërthamore hnARN Pararendës i ARN-së së pjekur të ARN-së së vogël bërthamore snARN Përfshirë në bashkimin e hnARN-së. ARN antisens anARN/micARN Rregullon shprehjen e gjeneve ARN Ribozim ARN enzimatike aktive
2. Cili është ndryshimi kryesor ndërmjet promotorëve prokariotikë dhe eukariote?
Prokariotik TTGACA --- TATAAT------Vendi i fillimit-35 -10 Përmirësues Eukariote---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Vendi i fillimit-110 -70 -25
3. Cilat janë aspektet kryesore të ndërtimit artificial të plazmideve natyrore?
Plazmidet natyrale shpesh kanë defekte, ndaj nuk janë të përshtatshme për t'u përdorur si bartës për inxhinierinë gjenetike dhe duhet të modifikohen dhe ndërtohen: a.Shtoni gjene të përshtatshme për shënues përzgjedhjeje, të tilla si dy ose më shumë, të cilat janë të lehta për t'u përdorur për përzgjedhje, zakonisht gjene antibiotike.b.Rritni ose zvogëloni vendet e përshtatshme të prerjes së enzimës për të lehtësuar rikombinimin.c.Shkurtoni gjatësinë, prisni fragmentet e panevojshme, përmirësoni efikasitetin e importit dhe rrisni kapacitetin e ngarkimit.d.Ndrysho replikonin, nga i ngushtë në të lirshëm, nga më pak kopje në më shumë kopje.e.Shtoni elemente të veçanta gjenetike sipas kërkesave të veçanta të inxhinierisë gjenetike
4. Jepni një shembull të një metode për shqyrtimin diferencial të cADN-së specifike për indet?
Përgatiten dy popullata qelizore, gjeni i synuar shprehet ose shprehet shumë në njërën nga qelizat, dhe gjeni i synuar nuk shprehet ose shprehet pak në qelizën tjetër, dhe më pas gjeni i synuar gjendet me hibridizimin dhe krahasimin.Për shembull, gjatë shfaqjes dhe zhvillimit të tumoreve, qelizat tumorale do të paraqesin mRNA me nivele të ndryshme shprehjeje sesa qelizat normale.Prandaj, gjenet e lidhura me tumorin mund të ekzaminohen me hibridizimin diferencial.Metoda e induksionit mund të përdoret gjithashtu për të ekzaminuar gjenet, shprehja e të cilave nxitet.
5. Gjenerimi dhe shqyrtimi i linjave qelizore hibridoma?
Qelizat B të shpretkës + qelizat e mielomës, shtoni glikol polietileni (PEG) për të nxitur shkrirjen e qelizave dhe qelizat e bashkimit të B-mielomës splenike të rritura në mjedisin HAT (që përmban hipoksantinë, aminopterin, T) vazhdojnë të zgjerohen.Shkrirja e qelizave përmban: Qelizat e shkrirjes shpretkë-shpretkë: të paaftë për t'u rritur, qelizat e shpretkës nuk mund të kultivohen in vitro.Qelizat e bashkimit kockor-kockor: nuk mund të përdorin hipoksantinën, por mund të sintetizojnë purinën përmes rrugës së dytë duke përdorur reduktazën e folatit.Aminopterina frenon reduktazën e folatit dhe kështu nuk mund të rritet.Qelizat e bashkimit kockor-shpretke: mund të rriten në HAT, qelizat e shpretkës mund të përdorin hipoksantinën dhe qelizat e kockave ofrojnë funksionin e ndarjes së qelizave.
6. Cili është parimi dhe metoda e përcaktimit të strukturës primare të ADN-së me metodën e përfundimit të terminalit didoksi (metoda Sanger)?
Parimi është të përdoret një terminator i zinxhirit nukleotid - 2,,3,-dideoksinukleotid për të përfunduar shtrirjen e ADN-së.Meqenëse i mungon 3-OH e nevojshme për formimin e lidhjeve 3/5/fosfodiester, pasi të përfshihet në zinxhirin e ADN-së, zinxhiri i ADN-së nuk mund të zgjerohet më tej.Sipas parimit të çiftëzimit të bazave, sa herë që ADN polimeraza ka nevojë për dNMP për të marrë pjesë në zinxhirin normalisht të zgjatur të ADN-së, ka dy mundësi, njëra është të marrësh pjesë në ddNTP, e cila rezulton në përfundimin e shtrirjes së zinxhirit deoksinukleotid;tjetra është të marrësh pjesë në dNTP, në mënyrë që zinxhiri i ADN-së të vazhdojë të zgjerohet derisa të inkorporohet ddNTP-ja tjetër.Sipas kësaj metode, mund të merret një grup i fragmenteve të ADN-së me gjatësi të ndryshme që përfundojnë në ddNTP.Metoda është që të ndahet në katër grupe përkatësisht ddAMP, ddGMP, ddCMP dhe ddTMP.Pas reagimit, elektroforeza me xhel poliakrilamid mund të lexojë sekuencën e ADN-së sipas brezave të notit.
7. Cili është efekti rregullues pozitiv i proteinës aktivizues (CAP) në transkriptim?
Proteina e receptorit të adenilatit ciklik (cAMP) CRP (proteina e receptorit cAMP), kompleksi i formuar nga kombinimi i cAMP dhe CRP quhet CAP (proteina cAMPactivated).Kur E. coli rritet në një mjedis ku mungon glukoza, sinteza e CAP rritet dhe CAP ka funksionin e aktivizimit të promotorëve të tillë si laktoza (Lac).Disa promotorë të varur nga CRP nuk kanë veçorinë tipike të sekuencës së rajonit -35 (TTGACA) që kanë promotorët e zakonshëm.Prandaj, është e vështirë që ARN polimeraza të lidhet me të.Prania e CAP (funksionit): mund të përmirësojë ndjeshëm konstantën lidhëse të enzimës dhe promotorit.Kryesisht tregon dy aspektet e mëposhtme: ① CAP ndihmon molekulën e enzimës të orientohet saktë duke ndryshuar konformacionin e promotorit dhe ndërveprimin me enzimën, në mënyrë që të kombinohet me rajonin -10 dhe të luajë rolin e zëvendësimit të funksionit të rajonit -35.②CAP gjithashtu mund të pengojë lidhjen e ARN polimerazës me vende të tjera në ADN, duke rritur kështu probabilitetin e lidhjes me promotorin e saj specifik.
8. Cilat hapa zakonisht përfshihen në një eksperiment tipik të rikombinimit të ADN-së?
a.Ekstraktoni gjenin e synuar (ose gjenin ekzogjen) të organizmit dhurues dhe lidhni atë në mënyrë enzimatike me një molekulë tjetër të ADN-së (vektor klonues) për të formuar një molekulë të re rekombinante të ADN-së.b.Transferoni molekulën rekombinante të ADN-së në qelizën marrëse dhe riprodhoni dhe ruajeni atë në qelizën marrëse.Ky proces quhet transformim.c.Ekzaminoni dhe identifikoni ato qeliza marrëse që kanë thithur ADN-në rekombinante.d.Kultivoni në masë qelizat që përmbajnë ADN-në rekombinante për të zbuluar nëse gjeni i huaj ndihmës është i shprehur.
9. Ndërtimi i bibliotekës së gjeneve Janë dhënë tre metoda për shqyrtimin e rekombinantëve dhe procesi është përshkruar shkurtimisht.
Ekzaminimi i rezistencës ndaj antibiotikëve, inaktivizimi i rezistencës me futje, shqyrtimi i njollave blu-të bardha ose ekzaminimi PCR, ekzaminimi diferencial, sonda e ADN-së Shumica e vektorëve të klonimit mbajnë gjenet e rezistencës ndaj antibiotikëve (anti-ampicilina, tetraciklina).Kur plazmidi transferohet në Escherichia coli, bakteret do të fitojnë rezistencë, dhe ato pa transferim nuk do të kenë rezistencë.Por nuk mund të dallojë nëse është riorganizuar apo jo.Në një vektor që përmban dy gjene rezistence, nëse një fragment i huaj i ADN-së futet në një nga gjenet dhe bën që gjeni të çaktivizohet, mund të përdoren dy kontrolle të pllakave që përmbajnë barna të ndryshme për të kontrolluar për rekombinantë pozitivë.Për shembull, plazmidi pUC përmban gjenin LacZ (që kodon β-galaktozidazën), i cili mund të dekompozojë substratin kromogjenik X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indol-β-D-galaktozid) për të prodhuar ngjyrë blu, duke e kthyer kështu tendosjen blu.Kur futet ADN-ja e huaj, gjeni LacZ nuk mund të shprehet dhe shtami është i bardhë, në mënyrë që të ekzaminohen bakteret rekombinante.
10. Shpjegoni procesin bazë të marrjes së kafshëve transgjenike nëpërmjet qelizave staminale embrionale?
Qelizat staminale embrionale (ES) janë qeliza embrionale gjatë zhvillimit embrional, të cilat mund të kultivohen artificialisht dhe të shumohen dhe kanë funksionin e diferencimit në lloje të tjera qelizash.Kultura e qelizave ES: Masa e brendshme qelizore e blastocistit izolohet dhe kultivohet.Kur ES kultivohet në një shtresë pa ushqyes, ajo do të diferencohet në qeliza të ndryshme funksionale si qelizat e muskujve dhe qelizat N.Kur kultivohet në një mjedis që përmban fibroblaste, ES do të ruajë funksionin e diferencimit.ES mund të manipulohet gjenetikisht dhe funksioni i tij i diferencimit mund të integrohet pa ndikuar në funksionin e tij të diferencimit, i cili zgjidh problemin e integrimit të rastësishëm.Futni gjenet ekzogjene në qelizat burimore embrionale, më pas implantoni në mitrën e minjve femra shtatzëna, zhvillohen në të vegjël dhe kryqëzohen për të përftuar minj homozigotë.
