Prezantimi:

ARN, emri shkencor acid ribonukleik, shkurtesa e tij vjen nga RiboNucleic Acid, është një lloj acidi nukleik i formuar duke lidhur të paktën dhjetëra ribonukleotide përmes lidhjeve fosfodiesterike.

Premisa e eksplorimit të ARN-së është nxjerrja e ARN-së totale pa ndotje, dhe parimi bazë i nxjerrjes së ARN-së mund të përmblidhet përafërsisht si më poshtë:

1. Pritini fillimisht qelizat

2. Më pas hiqni papastërtitë makromolekulare (proteina, lipide, ADN, etj.)

3. Së fundi, ARN precipitohet duke hequr kripërat dhe tretësit organikë dhe duke pastruar më tej ARN-në

E shkuara dhe e tashmja e metodës së nxjerrjes

Gjenerata e parë e metodës së nxjerrjes së ARN-së është metoda e precipitimit TRIzol (reagentët e përdorur përfshijnë izotiocianatin e guanidinës, fenolin, kloroformin, etj.) e shpikur nga një gjysh i quajtur Piotr Chomczynski dhe gjyshja Nicoletta Sacchi, sepse kjo shpikje lejon nxjerrjen e ARN-së Hulumtimi i shpejtë dhe i lehtë i ARN-së filloi që atëherë.

Më vonë, gjyshi ia shiti këtë patentë Invitrogen, dhe Invitrogen e promovoi këtë metodë në botë dhe u bë një metodë e përdorur gjerësisht.

Më vonë, Invitrogen u ble nga Thermo!

Produkti përfaqësues: Reagenti TRIZol i Invitrogen

Megjithatë, metoda e precipitimit TRIzol kërkon precipitim të shumëfishtë dhe nxjerrje të ARN-së, dhe reagentët e përdorur janë toksikë dhe kërkojnë një kohë të gjatë për të vepruar.

Prandaj, u krijua metoda e pastrimit me kolonë-enzimë të gjeneratës së dytë, duke përdorur membranën e xhelit silicë si një material specifik adsorbues të acidit nukleik për të maksimizuar rikuperimin e ARN-së në mostër duke hequr papastërtitë e tjera.

Metoda e gjeneratës së dytë thjeshton funksionimin në bazë të performancës së qëndrueshme, zvogëlon faktorin e rrezikut dhe përmirëson efikasitetin e nxjerrjes së ARN-së.

Produktet përfaqësuese: QIAGEN RNeasy dhe shumica e produkteve vendase

Megjithatë, të dyja metodat e gjeneratës së parë dhe të dytë kërkojnë përdorimin e DNase për të hequr kontaminimin e ADN-së, gjë që sjell disa shqetësime për eksperimentet e mëvonshme në rrjedhën e poshtme.DNaza e mbetur do të zvogëlojë efikasitetin e transkriptimit të kundërt dhe do të zvogëlojë sintezën e cDNA të vargut të parë, duke ndikuar kështu në saktësinë e rezultateve.

Prandaj, metoda e nxjerrjes së gjeneratës së tretë është optimizuar në bazë të gjeneratës së dytë.Eksperimenti nuk ka nevojë të shtojë asnjë enzimë dhe ARN-ja mund të merret lehtësisht vetëm me dy kolona.

Kolona 1: Kolona për pastrimin e ADN-së për të pastruar ADN-në

Kolona 2: Kolona vetëm me ARN thith dhe rikuperon në mënyrë specifike ARN-në

Një operacion kaq i thjeshtë jo vetëm që kursen kohë, por gjithashtu lehtëson funksionimin e eksperimenteve në rrjedhën e poshtme!

Produktet përfaqësuese: QIAGEN RNeasy Plus dheForegeneProdukte të serisë së pastrimit të ARN-së

(RNeasy Plus)

(e ForegeneKompleti i izolimit total të ARN-së së bimëve)

Të them në heshtje!Kompleti i ARN-së i Foregene paraqet gjithashtu një gomë RNase super të lehtë për t'u përdorur, i cili mund të heqë plotësisht 400μg RNase në sipërfaqen e ngurtë në 1 minutë, pa shtuar asnjë lëndë toksike në trupin e njeriut!

Fig1: Grafiku i krahasimit të procesit operacional

Produktet e Foregene mund të kompletojnë nxjerrjen e ARN-së në vetëm dy këngë, mos i bëni të tjerët xhelozë për përparimin e eksperimentit tuaj!

Fig2:Erezultatet eksperimentale grafik krahasimi

Gjenerata e parë (1: TRIzol)

Gjenerata e dytë (2: RNeasy e QIAGEN)

Gjenerata e tretë (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Fig3: Grafik qPCR (grafiku i kurbës së amplifikimit)

Gjenerata e parë (e gjelbër do të thotë TRIzol -, e kuqe do të thotë TRIzol +)

Gjenerata e dytë (blu qielli do të thotë QIAGEN RNeasy-, e kuqja do të thotë QIAGEN RNeasy +)

Gjenerata e tretë (blu do të thotë QIAGEN RNeasy plus, jeshile do të thotë Foregene)

(Shënim: Grafiku qPCR “-” tregon që DNaza nuk është shtuar dhe kontaminimi i ADN-së nuk është hequr. Prandaj, CT është më i lartë dhe rezultati nuk është i saktë; “+” tregon që DNaza është shtuar dhe ndotja e ADN-së është hequr, rezultati është i saktë)

Çdo përmirësim teknik do të thotë që funksionimi i eksperimentit po zhvillohet në një drejtim më të thjeshtë dhe më miqësor për përdoruesit.

Foregene synon të ndihmojë më shumë studiues shkencorë të kursejnë kohën dhe koston eksperimentale, të marrin rezultate eksperimentale me cilësi të lartë dhe të krijojnë së bashku arritje më të vlefshme kërkimore shkencore.