Autorë: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Njësia: Spitali Jiaozhou, Spitali Dongfang i lidhur me Universitetin Tongji

Aktualisht, lloji kryesor i mostrës për zbulimin e acidit nukleik të patogjenit të frymëmarrjes është tamponi i fytit.Ka shumë lloje të solucioneve të ruajtjes së mostrave të përdorura zakonisht, të gjitha duhet të ruhen në frigorifer ose të ngrihen për transport dhe ruajtje;Është e vështirë të kontrollohet i gjithë procesi i temperaturës së ulët gjatë procesit të grumbullimit dhe transportit, dhe është e vështirë të sigurohet kontrolli i cilësisë përpara testimit të mostrës.^[1-2].

RNase (RNase) është një endonukleazë që hidrolizon ARN-në, kryesisht duke shkëputur lidhjet fosfodiesterike midis nukleotideve.Molekula RNase është shumë e qëndrueshme, ka lidhje disulfide në strukturë dhe aktiviteti i saj nuk kërkon praninë e kationeve dyvalente, kështu që RNaza nuk denatyrohet lehtë dhe është e lehtë për t'u rindërtuar edhe pas temperaturës së lartë ose përdorimit të denaturantëve.RNazat ndahen në endogjene dhe ekzogjene.RNazat endogjene mund të lirohen në të njëjtën kohë kur qelizat çahen.Prandaj, eliminimi i rolit të RNase-ve endogjene është një hap shumë kritik në procesin e nxjerrjes së ARN-së.RNazat ekzogjene janë të shpërndara gjerësisht.RNazat ekzistojnë në ajër, lëkurën e njeriut, flokët dhe pështymë, të cilat janë arsye të rëndësishme për degradimin e lehtë të ARN-së.^[3].

Kërkesa e të dhënave

CANS-CL02-A009 “Aplikimi i Udhëzimeve të Akreditimit të Cilësisë dhe Kompetencës së Laboratorit Mjekësor në Fushën e Diagnozës Molekulare” në kërkesat teknike propozon që standardet e duhura të cilësisë së ujit të formulohen sipas aplikimit;Enë njëpërdorimshe hermetike:

RNase/Klasifikimi

(1) RNaza A

Ribonukleaza A (RNaza A), që rrjedh nga pankreasi i gjedhit, është një endoribonukleazë që mund të sulmojë në mënyrë specifike skajin 3' të mbetjeve të pirimidinës në ARN, duke prerë citozinën ose uracilin e formuar nga nukleotidet ngjitur.Lidhja fosfodiesterike, produkti përfundimtar i reaksionit është një nukleotid pirimidine 3' dhe një oligonukleotid me një nukleotid pirimidine 3' në fund.

(2) RNaza T1

Ribonukleaza T1 (RNase T1) rrjedh nga Aspergillus orjzae, ajo vepron në mënyrë specifike në fosfatin 3'-terminal të guaninës dhe vendi i ndarjes është midis fosfatit 3' të guaninës dhe hidroksilit 5' të nukleotideve ngjitur.Produkti përfundimtar i reaksionit është 3' acid guanilik dhe fragmente oligonukleotide me acid 3'guanilik në fund.

(3) RNaza H

Ribonukleaza H (RNaza H) u zbulua për herë të parë nga indi i timusit të viçit dhe gjeni i tij kodues është klonuar në Escherichia coli.Mund të degradojë në mënyrë specifike ADN-në: vargjet e ARN-së në duplekset hibride të ARN-së, duke rezultuar në oligonukleotide dhe mononukleotide me skajet 3'-OH dhe 5'-monofosfat, ajo nuk mund të degradojë ADN-në ose ARN-në me një ose dy-vargësh.

RNase

Funksioni dhe përdorimi

Ribonukleaza mund të katalizojë degradimin e acidit ribonukleik (ARN) dhe mund të sintetizohet artificialisht.Pomadë medicinale përdoret në mënyrë topike për të trajtuar traumat dhe dhimbjet e kyçeve.Sipas raporteve, ribonukleaza mund të ndryshojë metabolizmin e qelizave bujtëse, të pengojë sintezën e virusit, të pengojë përhapjen e virusit të influencës in vitro dhe të pengojë formimin e vaccinia dhe virusit herpes në embrionet e pulës.Përdorimi klinik i ribonukleazës me injeksion ditor intramuskular prej 180 mg, i dobishëm për trajtimin e encefalitit epidemik, ribonukleaza mund të katalizojë degradimin e acidit ribonukleik (ARN), dhe tani mund të sintetizohet artificialisht.Pomadë medicinale përdoret në mënyrë topike për të trajtuar traumat dhe dhimbjet e kyçeve.Sipas raporteve, ribonukleaza mund të ndryshojë metabolizmin e qelizave bujtëse, të pengojë sintezën e virusit, të pengojë përhapjen e virusit të influencës in vitro dhe të pengojë formimin e vaccinia dhe virusit herpes në embrionet e pulës.Përdorimi klinik i ribonukleazës me injeksion intramuskular ditor prej 180 mg është i dobishëm për trajtimin e encefalitit epidemik.

RNase

Përkufizimi i frenuesit

Përkufizimi i njësisë së frenuesit RNase: Sasia e enzimës që kërkohet për të frenuar 50% të aktivitetit të 5ng RNazës A është një njësi.

Si funksionojnë inhibitorët e RNase

Izotiocianati i guanidinës:

Izotiocianati i guanidinës është një përbërje organike me formulën molekulare C2H6N4S.Përdoret kryesisht në mjekësinë biologjike, reagentët kimikë, etj. Izotiocianati i Guanidinës është një agjent lizues i proteinave dhe shpesh përdoret si përbërësi kryesor i tretësirës së lizës në reagentët diagnostikues molekularë.Mund të lizojë indin, të shkatërrojë strukturën qelizore dhe të shkëputë acidin nukleik nga nukleoproteina dhe ka denatyrim të fortë në RNase.Është frenuesi më efektiv i RNase për momentin.

TRIZol është një reagent i ri për nxjerrjen totale të ARN-së që mund të nxjerrë drejtpërdrejt ARN totale nga qelizat ose indet.Ai përmban substanca të tilla si fenoli dhe izotiocianati i guanidinës, të cilat mund të prishin me shpejtësi qelizat dhe të pengojnë nukleazat e çliruara nga qelizat.

(Megjithatë, izotiocianati i guanidinës është i rrezikshëm për shëndetin e studiuesve laboratorikë.)

RNasin:

Glikoproteina acide e nxjerrë nga mëlçia e miut ose blastoderma e njeriut.Rnasina është një frenues jo konkurrues i RNase, i cili mund të lidhet me RNase të ndryshme për t'i çaktivizuar ato.

(Më shumë detaje: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htemperatura e lartë:

Temperatura e lartë është gjithashtu një mjet i zakonshëm i denatyrimit të proteinave.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC është një frenues i fortë, por jo i plotë i RNase, i cili mund të frenojë aktivitetin e RNase duke u kombinuar me unazën e imidazolit të aminoacideve të grupit aktiv RNase për të denatyruar proteinat.

Kompleksi vanadil ribonukleozid:

Një kompleks i formuar nga jonet e oksidit të vanadiumit dhe nukleozidet, i cili lidhet me RNazën në formën e substancave kalimtare, të cilat mund të pengojnë pothuajse plotësisht aktivitetin e RNazës.

tjera:

SDS, ureja, toka diatomike etj. gjithashtu kanë një efekt të caktuar frenues në RNazën.

Shqyrtimet e ekspertëve

Kryetekniku Li Yujie

Drejtor i Departamentit të Laboratorit, Spitali Jiaozhou, Spitali Dongfang i lidhur me Universitetin Tongji

Për të parandaluar biodegradimin e RNase ekzogjene, maska, doreza dhe kapele duhet të vishen dhe të zëvendësohen shpesh gjatë procesit të nxjerrjes së ARN-së.Të gjitha enët e qelqit duhet të piqen në një furrë tharjeje në 200°C për më shumë se 2 orë.Materialet e përdorura për pjekje, si p.sh. plastika, duhet të trajtohen me ujë DEPC dhe më pas të lahen me ujë të distiluar.Reagentët ose pajisjet e përdorura për nxjerrjen, ruajtjen dhe identifikimin e ARN-së duhet t'i dedikohen ARN-së dhe duhet të krijohet një zonë e pavarur e funksionimit të ARN-së.

referencat:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteret dhe viruset në nazofaringë menjëherë para fillimit të infeksioneve akute të frymëmarrjes së poshtme te fëmijët autoktonë australianë [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Dega e Kontrollit të Infeksionit Spitalor të Shoqatës Kineze të Mjekësisë Parandaluese.Udhëzime për mbledhjen dhe inspektimin e ekzemplarëve mikrobialë klinikë [J].Gazeta Kineze e Infeksionit Spitalor, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Testi klinik Vëllimi i Testit të Biologjisë Molekulare Dhjetë mijë Pse"