Analiza e mëposhtme e problemeve të mundshme nëBukaleshtupë/MTL card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Kolona e pastrimit është e bllokuar

Në këtë komplet, në operacionin e nxjerrjes së ADN-së gjenomike, kolona e pastrimit absorbohet drejtpërdrejt në përzierjen e lizës enzimatike të kampionit pa hapin e centrifugimit dhe kolona e pastrimit mund të bllokohet për shkak të enzimimit jo të plotë dhe viskozitetit të lartë të kampionit.

Shkaqet e mëposhtme të mundshme janë si më poshtë:

1. Tretje enzimatike jo e plotë e mostrave të indeve.

Rekomandim: Koha e përpunimit të mostrës së Foregene Proteazës mund të zgjatet në mënyrë të përshtatshme ose mund të merret supernatanti pas centrifugimit në 12,000 rpm (~ 13,400× g) për 5 min.

2. Përdorimi i tepërt i mostrave të indeve ose indeve të mëdha.

Rekomandim: Është mirë të mos kaloni 1Bukale shtupë në mostër;nëse kampioni është shumë i madh, rrisni dozën e Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 në përputhje me rrethanat.

3. Viskoziteti i kampionit është shumë i lartë.

Rekomandim: Mostrat mund të hollohen siç duhet me 10 mM Tris-HCl përpara nxjerrjes së ADN-së gjenomike.

4. Janë thithur fragmente të kartës së gjakut.

Rekomandim: Koha e centrifugimit kalimtar të hapit 6 të nxjerrjes gjenomike të njollave të gjakut (FTA Card) mund të zgjatet në mënyrë të përshtatshme.

Rendiment i ulët ose pa ADN

Shpesh ka një sërë faktorësh që ndikojnë në rendimentin e ADN-së gjenomike, duke përfshirë origjinën e mostrës, kushtet e ruajtjes së mostrës, përgatitjen e mostrës, manipulimin, etj.

ADN gjenomike nuk mund të merret gjatë ekstraktimit

Shkaqet e mundshme janë si më poshtë:

1. Ruajtja jo e duhur e mostrave ose ruajtja për një kohë të gjatë çon në degradimin e ADN-së gjenomike.

Rekomandim: Tamponët oral preferohet të merren kampione të freskëta dhe nuk këshillohet përdorimi i tamponëve të konservuar për operacionet e nxjerrjes së ADN-së gjenomike;mostrat e njollave të gjakut duhet të sigurojnë që cilësia është e kualifikuar dhe koha e ruajtjes nuk duhet të jetë shumë e gjatë.

2. Përdorimi shumë i vogël i indeve mund të rezultojë në mos nxjerrjen e ADN-së gjenomike përkatëse.

Rekomandim: Ndiqnibuccal fshini udhëzimet për marrjen e mostrave në udhëzuesin e funksionimit dhe fshijini sa më shumë që të jetë e mundur, në mënyrë që qelizat e mjaftueshme të mund të ngjiten në shtupë orale për nxjerrjen e ADN-së gjenomike;për nxjerrjen e mostrës së njollave të gjakut, zona e prerjes së njollave të gjakut mund të rritet siç duhet.

3. Proteaza Foregene ruhet në mënyrë të papërshtatshme, duke rezultuar në uljen e aktivitetit ose inaktivizimin e saj.

Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes sëForegene Proteaza ose zëvendësohet me një Proteazë të re Foregene për reaksion enzimatik.

4. Ruajtja e gabuar e kompletit ose koha e ruajtjes është shumë e gjatë, duke rezultuar në dështimin e disa komponentëve në komplet.

Rekomandim: Blini një të reBukale tampon ADN-nëizolim komplet për procedurat përkatëse.

5. Buffer WB nuk shton etanol absolut.

Rekomandim: Konfirmoni që buferi WB shton volumin e saktë të etanolit absolut.

6. Eluenti nuk është shtuar saktë në filmin e silikonit.

Rekomandim: Shtoni 65°CEluenti i ngrohur paraprakisht bie në mes të membranës silikoni dhe lihet në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.

LADN gjenomike me prodhimtari i izoluar

Shkaqet e mëposhtme të mundshme janë si më poshtë:

1. Ruajtja jo e duhur e mostrave ose ruajtja për një kohë të gjatë çon në degradimin e ADN-së gjenomike.

Rekomandim: Tamponat orale preferohet të merren kampione të freskëta dhe tamponët e konservuar nuk duhet të përdoren për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.

2. Nëse sasia e mostrës së indeve është shumë e vogël, përmbajtja e ADN-së gjenomike e nxjerrë do të jetë më e vogël.

Rekomandim: Ndiqni udhëzimet e marrjes së mostrave nga goja në udhëzuesin e përdorimit, duke fshirë sa më shumë që të jetë e mundur në mënyrë që qelizat e mjaftueshme të mund të ngjiten në tampon orale për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.

3. Proteaza Foregene ruhet në mënyrë të papërshtatshme, duke rezultuar në uljen e aktivitetit ose inaktivizimin e saj.

Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes sëthe Foregene Proteaza ose zëvendësohet me një të re Foregene Proteaza për reaksion enzimatik.

4. Problemet e eluentit.

Rekomandim: Përdorni Buffer EB për elucionin;nëse përdorni ddH₂O ose eluentët e tjerë, konfirmoni që pH e eluatit është midis 7.0-8.5.

5. Eluati nuk shtohet saktë me pika.

Rekomandim: Shtoni pika eluenti në mes të membranës silikoni dhe lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.

6. Lëngu i elucionit akumulohet shumë pak.

Rekomandim: Përdorni eluent për elucionin e ADN-së gjenomike siç kërkohet në udhëzime, të paktënjo më pak se 15μl.

Lo pastërti of ADN gjenomikei izoluar

Pastërtia e ulët gjenomike e ADN-së mund të çojë në dështim ose rezultate të pakënaqshme të eksperimenteve në rrjedhën e poshtme, si p.sh.: enzimat nuk mund të hapen, PCR nuk mund të marrë fragmentin e gjenit me interes, etj.

Shkaqet e mundshme janë si më poshtë:

1. Ndotja heteroproteinike, ndotja me ARN.

Analiza: Kolona e pastrimit nuk është larë duke përdorur Buffer PW;kolona e pastrimit të larjes Buffer PW nuk është larë duke përdorur shpejtësinë e duhur centrifugale.

Rekomandim: Sigurohuni që të mos ketë reshje në supernatant përpara se të shtoni etanol;sigurohuni që të lani kolonën e pastrimit sipas udhëzimeve dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.

2. Ndotja e joneve papastërti.

Analiza: Kolona e pastrimit të larjes së buferit WB u hoq ose u la vetëm një herë, duke rezultuar në kontaminim jonik të mbetur.

Rekomandim: Sigurohuni që të lani Buffer WB 2 herë sipas udhëzimeve për të hequr sa më shumë që të jetë e mundur jonet e mbetura.

3. Kontaminimi me enzimë ARN.

Analiza: RNase të huaja u shtuan në tampon;Operacioni i larjes së buferit PW ishte i pasaktë, duke rezultuar në mbetje RNase, duke ndikuar në operacionet eksperimentale të ARN-së në rrjedhën e poshtme, si transkriptimi in vitro.

Rekomandim: Acidi nukleik i serisë ForegeneisolaKompletet tion mund të heqin ARN-në pa shtim shtesë të RNase,kështu Kompleti i izolimit të ADN-së me shtupë bukale/kartë FTAnevojiten't shtoni RNase;sigurohuni që të ndiqni udhëzimet për kolonën e pastrimit të larjes Buffer PW dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.

4. Mbetjet e etanolit.

Analiza: Buffer WB nuk kreu centrifugim me tub bosh pas larjes së kolonës së pastrimit.

Rekomandim: Kryeni funksionimin e saktë të centrifugimit të tubit bosh sipas udhëzimeve.

5. Ndotje të tjera me papastërti.

Analiza: Mostrat e ruajtura ose mostrat speciale nuk janë paratrajtuar.

Rekomandim: Trajtoni plotësisht kampionin sipas udhëzimeve.