Tipari i jashtëzakonshëm i reaksionit PCR është kapaciteti i tij i madh përforcues dhe ndjeshmëria jashtëzakonisht e lartë.Për të përmirësuar performancën e PCR dhe efikasitetin e zbulimit, ne jemi të përkushtuar të përmirësojmë kapacitetin e amplifikimit të PCR dhe ndjeshmërinë e zbulimit, por dhimbja e kokës është në procesin e eksperimentit.Shpesh ndodhin rezultate false dhe një sasi shumë e vogël e ndotjes së kryqëzuar të mostrës ose ndotjes së produktit PCR mund të shkaktojë rezultate false në eksperiment.
Pesë lloje të ndotjes së produktit PCR
Ka shumë arsye për ndotjen me PCR, të cilat mund të ndahen përafërsisht në kategoritë e mëposhtme:
Kontaminimi i mostrës shkaktohet kryesisht nga kontaminimi i kontejnerit për mbledhjen e kampionit, ose kur kampioni vendoset, ai rrjedh nga kontejneri për shkak të mbylljes së lirë, ose kampioni ngjitet në pjesën e jashtme të enës, gjë që shkakton kontaminim të kryqëzuar;Kontaminimi çon në kontaminim ndërmjet ekzemplarëve;disa ekzemplarë mikrobikë, veçanërisht viruset, mund të përhapen me aerosole ose të formojnë aerosole, duke rezultuar në kontaminim të ndërsjellë.
Arsyeja kryesore është se gjatë përgatitjes së reagentëve PCR, pistoleta e mostrës, kontejneri, uji i dyfishtë i distiluar dhe tretësirat e tjera kontaminohen nga shablloni i acidit nukleik PCR.
Në laboratorët e biologjisë molekulare dhe disa laboratorë që përdorin plazmide të klonuara si kontrolle pozitive, problemi i kontaminimit të klonuar me plazmidë është gjithashtu i zakonshëm.Për shkak se përmbajtja e plazmidit të klonimit në vëllim njësi është mjaft e lartë, dhe nevojiten më shumë mjete dhe reagentë në procesin e pastrimit, dhe plazmidi në qelizat e gjalla ka shumë të ngjarë të kontaminohet për shkak të aftësisë së fortë të rritjes dhe riprodhimit të qelizave të gjalla.
Kontaminimi i produkteve të përforcuara është problemi më i zakonshëm i kontaminimit në reaksionet PCR.Për shkak se sasia e kopjes së produktit PCR është e madhe (përgjithësisht 1013 kopje/ml), e cila është shumë më e lartë se kufiri i numrit të kopjeve të zbulimit të PCR, një sasi shumë e vogël e kontaminimit të produktit PCR mund të shkaktojë rezultate false.
Ndotja me aerosol është forma më e mundshme e ndotjes së produkteve PCR, dhe është gjithashtu më e lehta për t'u neglizhuar.Formohet nga fërkimi midis sipërfaqes së lëngshme dhe ajrit.Në përgjithësi, ndotja e aerosolit mund të formohet kur hapet kapaku, kur kampioni aspirohet ose edhe kur tubi i reagimit tronditet fuqishëm.Sipas llogaritjeve, një grimcë aerosoli mund të përmbajë 48 mijë kopje, ndaj ndotja e shkaktuar prej saj është një problem që meriton vëmendje të veçantë.
Në veçanti, laboratorët e testimit shpesh përdorin të njëjtin çift abetaresh për të testuar një gjen të caktuar.Me kalimin e kohës, një sasi e madhe e ndotjes së produktit PCR do të ndodhë në hapësirën laboratorike.Pasi të ndodhë një ndotje e tillë, është e vështirë ta eliminoni atë në një kohë të shkurtër.
Për tre llojet e para të ndotjes, ne mund të përdorim mjete efektive për të shmangur, por ndotja e shkaktuar nga produktet PCR është e vështirë të parandalohet, veçanërisht në ndërtimin e laboratorëve PCR jo standarde.Në procesin e PCR, kur maja e pipetës thith dhe fryn lëngun, dhe kapaku i tubit PCR hapet, do të formohet një aerosol.Molekulat e ADN-së të bartura nga aerosoli (një aerosol mund të mbajë dhjetëra mijëra ADN) janë të vështira për t'u eliminuar sepse ato notojnë në ajër.Pasi të prezantohet raundi tjetër i eksperimenteve PCR, do të ndodhin në mënyrë të pashmangshme pozitive false.
Siç tregohet në figurën më poshtë, kontrolli negativ përforcoi gjithashtu brezin përkatës të interesit:
Pjesa e parë e kësaj çështjeje të ndotjes dhe parandalimit PCR është prezantuar këtu.Numri tjetër do t'ju sjellë pjesën e dytë "Parandalimi i ndotjes së produktit PCR", ndaj qëndroni të sintonizuar!
Koha e postimit: 25 korrik 2017
