Krijoni SOP eksperimenti PCR për të standardizuar sjelljen e personelit të eksperimentit.
Eksperimentuesi respekton rreptësisht procedurat e funksionimit dhe minimizon ndotjen PCR që mund të shkaktohet nga faktorët njerëzorë ose parandalon shfaqjen e ndotjes.Për më tepër, eksperimentuesi duhet të ketë njohuritë dhe aftësitë përkatëse profesionale, duke përfshirë aftësinë në funksionimin e pajisjeve përkatëse, qartësimin e të gjithë procesit të punës, zotërimin e metodave të trajtimit të ndotjes dhe metodave të kontrollit të cilësisë laboratorike, si dhe aftësinë për të interpretuar saktë rezultatet e testit.
Krijoni një laborator standard PCR.
Laboratori PCR është i ndarë në parim në katër zona, përkatësisht zona e përgatitjes së reagentit, zona e përpunimit të mostrës, zona e amplifikimit dhe zona e analizës së produktit të amplifikimit.Dy zonat e para janë zona të para-amplifikimit, dhe dy zonat e fundit janë zona pas amplifikimit.Zona e para-amplifikimit dhe zona e pas-amplifikimit duhet të ndahen rreptësisht.Materialet eksperimentale, reagentët, letra regjistrimi, stilolapsa, materiale pastrimi, etj., mund të rrjedhin vetëm nga zona e para-amplifikimit në zonën e pas amplifikimit, domethënë nga zona e përgatitjes së reagentit → zona e përpunimit të mostrës → zona e amplifikimit → zona e analizës së produktit të amplifikimit dhe nuk duhet të rrjedhin mbrapsht.Rrjedha e ajrit në laborator duhet gjithashtu të rrjedhë nga zona e para-amplifikimit në zonën e pas amplifikimit, dhe jo të rrjedhë prapa.Dizajni ideal i laboratorit PCR është paraqitur më poshtë:
Figura A: Mënyra ideale e konfigurimit të laboratorit PCR me presion negativ në dhomën e tamponit
Figura B: Mënyra ideale e konfigurimit të laboratorit PCR me presion pozitiv në dhomën e tamponit
Diagramet e konfigurimit të laboratorit PCR të dhëna në Figurën A dhe Figura B duhet të jenë një mënyrë më ideale e konfigurimit dhe laboratori me kushte mund t'i referohet këtij modaliteti për dizajn.Për laboratorët e zakonshëm, rekomandohet që zona e amplifikimit të PCR dhe zona e analizës së produktit të mund të ndahen dhe hapja e kapakut duhet të zvogëlohet sa më shumë që të jetë e mundur në zonën e përgatitjes së mostrës dhe zonën e amplifikimit të PCR.Mbani mend: Produktet dhe furnizimet eksperimentale në zonën e analizës së produktit janë rreptësisht të ndaluara që të dërgohen në zonën e përgatitjes së mostrës dhe në zonën e amplifikimit të PCR.
Nëse laboratori kryen vetëm zbulimin dhe identifikimin e PCR, rekomandohet përdorimi i PCR sasiore fluoreshente në vend të PCR konvencionale.
Rezultatet e zbulimit sasior të PCR të fluoreshencës mund të mblidhen dhe analizohen me sinjale fluoreshence, kështu që nuk ka nevojë të hapet kapaku për elektroforezë pas reagimit, gjë që shmang ndotjen e produktit PCR të shkaktuar nga rrjedhja e produkteve të reaksionit për të formuar aerosole.Nëse rritni numrin e hapjeve të kapakut gjatë hapit të ngarkimit të elektroforezës së xhelit, ka të ngjarë të ndodhë ndotje me aerosol.Rekomandohet të promovohet aplikimi i PCR sasiore dhe gradualisht të zëvendësohet PCR cilësore.
Sistemi i ndotjes së produktit UNG anti-PCR përdoret për reaksionin PCR.
Sistemi përdor dUTP në vend të dTTP.Pas reaksionit PCR, të gjitha produktet PCR (fragmentet e ADN-së) inkorporohen me dUTP;në raundin tjetër të reaksionit PCR, enzima UNG e shtuar në sistem inkubohet në 37°C për 5 minuta përpara PCR, e cila mund të degradojë në mënyrë specifike të gjitha fragmentet e ADN-së që përmbajnë dUTP dhe më pas të kryejë reaksionin PCR.Kjo mund të largojë plotësisht ndotjen e aerosolit të shkaktuar nga produktet PCR.Efekti tregohet në figurën më poshtë:
Shënim: Për serinë e drejtpërdrejtë PCR, ju mund të zgjidhni produktet e serisë së sistemit të kontaminimit të produkteve anti-PCR të ForegeneSugjeroni
Për laboratorët që kryejnë testime gjenotipizimi në shkallë të gjerë, rekomandohet fuqimisht përdorimi i sistemit të kontaminimit të produkteve UNG anti-PCR për testimin e reagentëve, përveç ndërtimit të laboratorëve të arsyeshëm.
Kujtesë: Përdorimi i këtij sistemi nuk mund të heqë ndotjen e produktit PCR që është shkaktuar tashmë.Prandaj, sistemi UNG duhet të përdoret në fillim të testit përkatës dhe sistemi UNG duhet të përdoret për amplifikimin e PCR, në mënyrë që të parandalohet kontaminimi i produkteve PCR False pozitive.
Rekomandohet përdorimi i sistemit Direct PCR-UNG të Foregene gjatë kryerjes së testeve në shkallë të gjerë, si p.sh.
Kompleti PCR Direct Leaf Plant-UNG;
Kompleti PCR i drejtpërdrejtë i farave të bimëve-UNG;
Kit PCR Direct për indet e kafshëve-UNG;
Kit PCR Direct Tail Mouse-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Kjo seri kompletesh nga Foregenejo vetëm që mund të kryejë zbulimin e PCR shpejt dhe në një shkallë të gjerë, por gjithashtu të parandalojë dhe kontrollojë në mënyrë efektive ndotjen e produktit PCR.
Koha e postimit: Mar-19-2021
