Ndërtimi i SOP System

Krijoni SOP eksperimenti PCR për të standardizuar sjelljen e personelit të eksperimentit.

Eksperimentuesit respektojnë rreptësisht procedurat e funksionimit dhe minimizojnë ndotjen PCR që mund të shkaktohet nga faktorët njerëzorë ose parandalojnë shfaqjen e ndotjes në operacion.Për më tepër, eksperimentuesi duhet të ketë njohuritë dhe aftësitë përkatëse profesionale, duke përfshirë aftësinë në funksionimin e pajisjeve përkatëse, qartësimin e të gjithë procesit të punës, zotërimin e metodave të trajtimit të ndotjes dhe metodave të kontrollit të cilësisë laboratorike, si dhe aftësinë për të interpretuar saktë rezultatet e testit.

Ndërtimi i laboratorit standard të PCR

Laboratori PCR është i ndarë në parim në katër zona, përkatësisht zona e përgatitjes së reagentit, zona e përpunimit të mostrës, zona e amplifikimit dhe zona e analizës së produktit të amplifikimit.Dy zonat e para janë zona të para-amplifikimit, dhe dy zonat e fundit janë zona pas amplifikimit.Zona e para-amplifikimit dhe zona e pas-amplifikimit duhet të ndahen rreptësisht.Materialet eksperimentale, reagentët, letra regjistrimi, stilolapsa, materiale pastrimi etj. mund të rrjedhin vetëm nga zona e para-amplifikimit në zonën e pas amplifikimit, domethënë nga zona e përgatitjes së reagentit, zona e përpunimit të kampionit, zona e amplifikimit dhe zona e analizës së produktit të amplifikimit dhe nuk duhet të rrjedhin në drejtim të kundërt.Rrjedha e ajrit në laborator duhet gjithashtu të rrjedhë nga zona e para-amplifikimit në zonën e pas amplifikimit, jo në drejtim të kundërt.

Zvogëloni hapat eksperimentalë

Nëse laboratori kryen vetëm zbulimin dhe identifikimin e PCR, rekomandohet përdorimi i PCR sasiore fluoreshente në vend të PCR konvencionale.

Rezultatet e zbulimit sasior të PCR të fluoreshencës mund të mblidhen dhe analizohen me sinjale fluoreshente, kështu që nuk ka nevojë të hapet kapaku për elektroforezë pas reaksionit, gjë që shmang ndotjen e produkteve PCR të shkaktuar nga rrjedhja e produkteve të reaksionit për të formuar aerosole.Nëse rritni numrin e hapjeve të kapakut gjatë hapit të ngarkimit të elektroforezës së xhelit, ka të ngjarë të ndodhë ndotje me aerosol.Rekomandohet të promovohet aplikimi i PCR sasiore dhe gradualisht të zëvendësohet PCR cilësore.

Miratimi i sistemit kundër ndotjes UNG

Sistemi i ndotjes së produktit UNG anti-PCR përdoret për reaksionin PCR.

Sistemi përdor dUTP në vend të dTTP.Pas reaksionit PCR, të gjitha produktet PCR (fragmentet e ADN-së) inkorporohen me dUTP;në raundin tjetër të reaksionit PCR, enzima UNG e shtuar në sistem inkubohet në 37°C për 5 minuta përpara PCR, e cila mund të jetë specifike Degradoni të gjitha fragmentet e ADN-së që përmbajnë dUTP dhe më pas kryeni reaksionin PCR.Kjo mund të largojë plotësisht ndotjen e aerosolit të shkaktuar nga produktet PCR.Efekti tregohet në figurën më poshtë:

Shënim: Për serinë direkte PCR, mund të zgjidhni produktet e serisë së sistemit të ndotjes së produkteve anti-PCR të FJ Biotech

Sugjeroni

Për laboratorët që kryejnë testime gjenotipizimi në shkallë të gjerë, rekomandohet fuqimisht përdorimi i sistemit të kontaminimit të produkteve UNG anti-PCR për testimin e reagentëve, përveç ndërtimit të laboratorëve të arsyeshëm.

Kujtesë: Përdorimi i këtij sistemi nuk mund të heqë ndotjen e produktit PCR që është shkaktuar tashmë.Prandaj, sistemi UNG duhet të përdoret në fillim të testit përkatës dhe sistemi UNG duhet të përdoret gjithmonë për amplifikimin e PCR, në mënyrë që të parandalohet ndotja e produkteve PCR.Pozitiv i rremë.

Rekomandohet përdorimi i sistemit Direct PCR-UNG të Forge Biotech gjatë kryerjes së testeve në shkallë të gjerë, si p.sh.: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

Kompleti PCR i drejtpërdrejtë i farave të bimëve-UNG;

Kit PCR Direct për indet e kafshëve-UNG;

Kit PCR Direct Tail Mouse-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Kjo seri komplete nga Foregene jo vetëm që mund të kryejë zbulimin e PCR shpejt dhe në shkallë të gjerë, por gjithashtu parandalon dhe kontrollon në mënyrë efektive ndotjen e produktit PCR.