Enzima me fillim të nxehtë Taq përdoret gjerësisht.Krahasuar me polimerazën e zakonshme të ADN-së, enzima e ndezjes së nxehtë Taq mund të shmangë në mënyrë efektive disa përforcime jo specifike dhe formimin e dimerëve të primerit dhe mund të përmirësojë në mënyrë efektive shkallën e suksesit të amplifikimit të gjenit të synuar.Veçanërisht në fushën e testimit gjenetik, enzima e ndezur Taq është identifikuar si një standard i detyrueshëm në industri dhe polimeraza e zakonshme e ADN-së nuk duhet të përdoret.Siç mund të shihet nga sa më sipër, enzimat Taq me fillim të nxehtë përdoren gjerësisht.Aktualisht, ka shumë marka të enzimave Taq me fillim të nxehtë në tregun vendas, por nuk ka shumë enzima Taq me fillim të nxehtë me cilësi të lartë.Përballë kaq shumë produkteve të enzimës Taq me fillim të nxehtë, si duhet të zgjedhim?

1. Zgjidhni enzimën e ndezjes së nxehtë Taq me efikasitet të lartë amplifikimi

Efikasiteti i amplifikimit të PCR është i lidhur ngushtë me performancën e enzimës Taq.Pasi një sistem i mirë i reaksionit të enzimës Taq është optimizuar, efikasiteti i amplifikimit është mbi 95%, dhe diapazoni i amplifikimit të sasisë fillestare të shabllonit është i gjerë.Amplifikimi i kënaqshëm mund të arrihet kur përmbajtja e gjenit të synuar është e ulët dhe nuk është e lehtë të helmohesh kur sasia e shabllonit është e lartë dhe periudha e amplifikimit eksponencial është e gjatë.Për enzimën Taq me performancë të dobët, edhe nëse sistemi i reagimit është optimizuar për shumë herë, efikasiteti i amplifikimit është akoma më pak se 90%, forma "S" e kurbës së amplifikimit nuk është e dukshme, pjerrësia është e vogël dhe kurba është e sheshtë.Kur sasia e shabllonit është e ulët, ajo nuk mund të përforcohet, dhe kur sasia e shabllonit është e lartë, efekti i amplifikimit nuk është ideal.Prandaj, përzgjedhja e polimerazave të ADN-së me efikasitet të lartë amplifikimi është vendimtare për suksesin e PCR dhe qPCR.

2. Zgjidhni enzimën Taq me fillim të nxehtë me fuqi të fortë enzimë

Fuqia enzimatike e enzimës Taq lidhet me efikasitetin e amplifikimit.Në përgjithësi, sa më e fortë të jetë fuqia enzimatike e enzimës Taq me fillim të nxehtë, aq më e gjatë është periudha e rritjes eksponenciale e amplifikimit të PCR, aq më tipike është kurba e 'formës S', aq më e lartë është vlera e sinjalit të fluoreshencës dhe aq më e përshtatshme për zbulimin e PCR multipleks.Polimerazat e markës së ADN-së me fuqi të dobët enzimatike në përgjithësi mund të mbështesin vetëm reaksionet 2-plex.Kur bëhen reaksione me 3 plex, kurba e amplifikimit është e ulët, vlera e sinjalit të fluoreshencës është e ulët dhe nuk ka kurbë tipike të amplifikimit, kështu që rezultatet janë të vështira për t'u gjykuar.

3. Zgjidhni një enzimë Taq me startim të nxehtë me ndjeshmëri të lartë

Në përgjithësi, ADN polimeraza ka efikasitet të lartë përforcues dhe ndjeshmëri të lartë, por ka edhe mospërputhje.Nëse bollëku i gjenit të synuar të kampionit që do të amplifikohet është i ulët, rekomandohet të testohet ndjeshmëria e amplifikimit të enzimës Taq.Metoda më e zakonshme e zbulimit është kryerja e hollimit të gradientit 10-fish ose 5-fish të fragmentit plazmid të gjenit të synuar, kryerja e zbulimit të PCR në hollimin më të ulët dhe përzgjedhja e enzimës Taq të fillimit të nxehtë me ndjeshmëri më të lartë zbulimi.

Nga sa më sipër mund të shihet se studiuesit duhet të zgjedhin sipas kërkesave të tyre eksperimentale dhe kushteve të financimit.Është më mirë të bëhet një eksperiment i amplifikimit të hollimit të gradientit për të zbuluar efikasitetin dhe ndjeshmërinë e amplifikimit të enzimës Taq me fillim të nxehtë.

Një shembull i Foregene's Taq ADN Polimeraza:

Foreasy HS Taq ADN Polimeraza

Përshkrim

Foreasy HS Taq ADN Polimeraza është një polimerazë e ADN-së e shprehur në bakteret inxhinierike Escherichia coli me anë të teknologjisë së rikombinimit të gjeneve.Enzima është e kombinuar me një tampon reaksioni unik, i cili e bën produktin shumë rezistent dhe të pajtueshëm, dhe mund të përdorë drejtpërdrejt lizën e mostrës (sistemi Foregene Lysis) si një shabllon për reaksionet e zbulimit.

Aplikacion

Zbulimi cilësor i PCR dhe PCR sasior i shablloneve të pastruar dhe shablloneve jo të pastruar.

Kontrolli i cilësisë

1. Nuk u zbulua aktivitet ekzogjen nukleaza

2. Metoda PCR për zbulimin e ADN-së gjenomike të mbetur pa bujtës

3. Mund të amplifikojë në mënyrë efektive gjenet me një kopje të vetme në gjenomin njerëzor

4. Ruani në temperaturën e dhomës për një javë, ndryshime të dukshme të aktivitetit

Detajet e produktit: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/