Plumbi

ARN e gjatë jo-koduese, lncARN është një ARN jo-koduese me një gjatësi më të madhe se 200 nukleotide, përgjithësisht midis 200-100000 nt.lncARN rregullon shprehjen e gjeneve në nivelet epigjenetike, transkriptuese dhe pas-transkriptuese dhe merr pjesë në heshtjen e kromozomit X, ngulitjen e gjenomit dhe modifikimin e kromatinës, aktivizimin e transkriptimit, ndërhyrjen e transkriptimit, transportin bërthamor, rregullimin e ciklit qelizor, diferencimin qelizor, dhe efektet e tjera të kompenzimit të dozës lidhen me zhvillimin, rregullimin e kompenzimit të dozës dhe efektet e tjera të lidhura me zhvillimin e kompenzimit të dozës. dhe parandalimin e sëmundjeve njerëzore, dhe aktualisht janë një nga pikat e nxehta në fushën e biomjekësisë.

01  Llojet dhe karakteristikat e LncARN

lncARN ndahet në shumë lloje sipas burimeve të ndryshme të formimit të saj, siç tregohet në figurën e mësipërme.Ka karakteristikat e mëposhtme:

1. lncARN-të janë zakonisht më të gjata, me shprehje dinamike dhe metoda të ndryshme bashkimi gjatë diferencimit
2. Krahasuar me gjenet koduese, lncARN zakonisht ka një nivel më të ulët të shprehjes
3. Shumica e lncARN-ve kanë specifikë të dukshme të shprehjes kohore dhe hapësinore në procesin e diferencimit dhe zhvillimit të indeve
4. Ka shprehje karakteristike në tumoret dhe sëmundjet e tjera
5. Vendndodhjet nënqelizore të lncARN janë të ndryshme
6. Sekuenca është e ulët në konservim, por funksioni ka një shkallë të caktuar ruajtjeje, etj.

02 Pyetjet e bëra më shpesh në lidhje me transkriptimin e kundërt të LncRNA

Për shkak të përmbajtjes së ulët të lncARN-së në qeliza, gjatësisë së gjatë dhe strukturës së nivelit të lartë, një ARN e tillë shpesh ka struktura komplekse si sythe të trungut ose kapëse flokësh, dhe RT-qPCR është e prirur ndaj problemeve të transkriptimit të pasuksesshëm të kundërt ose efikasitetit të ulët.

03 Zgjidhja e transkriptimit të kundërt të LncARN-së

Në rregullin qendror, procesi i viruseve ARN që përdorin transkriptazën e tyre të kundërt për të sintetizuar ADN-në duke përdorur ARN-në si shabllon quhet transkriptim i kundërt.Procesi i përdorimit të transkriptazës së kundërt të virusit ARN për të sintetizuar modelin cDNA in vitro quhet transkriptim i kundërt.Elementët kryesorë të përfshirë në sistemin e transkriptimit të kundërt: shabllonin e ARN-së, transkriptazën e kundërt, primerët dhe përbërës të tjerë.

1. shabllon i ARN-së

Ndikimi i shabllonit të ARN-së në transkriptimin e kundërt reflektohet në strukturën, pastërtinë dhe integritetin e tij.Sa më i lartë të jetë pastërtia dhe integriteti i ARN-së së nxjerrë, aq më i lartë është efikasiteti i transkriptimit të kundërt dhe aq më të sakta janë rezultatet sasiore të mëvonshme.ARN-ja e pastruar nga reagentët ekstraktues të ARN-së të përdorur zakonisht përmban mbetje alkooli dhe kripërash guanidine, të cilat kanë një efekt të fortë frenues në shumicën e transkriptazës së kundërt.

2.Transkriptaza e kundërt

Transkriptaza e kundërt ka një ndikim kyç në të gjithë sistemin e transkriptimit të kundërt.Temperatura e përshtatshme për transkriptazën e kundërt e përdorur në shumicën e laboratorëve është përgjithësisht 42°C.Në fakt, hapja e strukturës së ARN-së të nivelit të lartë kërkon një temperaturë më të lartë dhe kërkesat për transkriptazën e kundërt janë më të larta.

3.Abetare

Primerët e transkriptimit të kundërt përfshijnë primerë specifikë për gjen, primerë të rastësishëm dhe primerë Oligo dT.Shumica e lncARN-ve nuk përmbajnë bishta polyA dhe është e rëndësishme që të përputhen siç duhet abetaret e rastësishme me Oligo dT.

4. Komponentët e tjerë

Duke pasur parasysh faktin se ARN është veçanërisht e lehtë për t'u degraduar, futja e komponentëve në sistemin e transkriptimit të kundërt mund të minimizohet, gjë që mund të parandalojë në mënyrë efektive hyrjen e RNase dhe të sigurojë përparimin e qetë të transkriptimit të kundërt.

Foregjenitmerr nga shablloni i ARN-së, transkriptimi i kundërt në qPCR

Shoqëroni plotësisht zbulimin tuaj të lncRNA

ARN totale e kafshëve IngushëllimKit (me kolonën e heqjes së gADN-së)

ARN totale I qelizësngushëllimKit (me kolonën e heqjes së gADN-së)

Lnc-RT HeroTM I (Me gDNase) (Super Premix për sintezën e cDNA të vargut të parë nga lncRNA)

PCR EasyTM-SYBR Green I në kohë reale

Aavantazhet ofEkstraktimi i ARN-së:

Kompleti përdor teknologjinë e nxjerrjes së ARN-së të gjeneratës së tretë, nuk ka nevojë të përdoret DNase.

11 minuta nga qelizat e kultivuara me pllaka 96, 24, 12 dhe 6 pusesh, nxjerrje me efikasitet të lartë të ARN-së totale të qelizave pa gADN, me pastërti të lartë dhe me cilësi të lartë.

Përparësitë e transkriptimit të kundërt të lncRNA:

Një sistem transkriptimi i kundërt i zhvilluar posaçërisht për LncRNA për të hequr shpejt kontaminimin gjenomik të ADN-së.

Sistemi i transkriptimit të kundërt ka stabilitet të lartë termik dhe ende ka performancë të mirë të transkriptimit të kundërt në 50°C.

Modelet me përmbajtje të lartë GC dhe strukturë komplekse dytësore mund të ndryshohen me efikasitet të lartë.

Përparësitëof qPCR:

Fillimi i nxehtë Foregene Taq Polymerase ka efikasitet më të lartë të amplifikimit, ndjeshmëri më të lartë të amplifikimit dhe specifikë më të lartë amplifikimi

Real PCR Easy Mix i optimizuar e bën SYBR Green I të ketë ndjeshmëri më të lartë zbulimi dhe intensiteti i tij i fluoreshencës është 3-5 herë më i lartë se i produkteve të ngjashme, gjë që mund të plotësojë nevojat e llojeve të ndryshme të eksperimenteve sasiore të fluoreshencës.