Sa shumë dini

Rreth Nnxjerrja e acidit ukleik

Fillimi dhe fundi i acidit nukleik të pastruar

Gjithçka është e vështirë në fillim, acidi nukleik i pastruar është më i madhi

Fillimi i eksperimenteve molekulare, për eksperimentet e mëvonshme

Suksesi ose dështimi ka një ndikim vendimtar.

Spektrofotometri UV gjurmë/ultra-gjurmë është i favorizuar nga shumë studiues shkencorë sepse mund të zbulojë përqendrimin e acidit nukleik dhe mbetjet e joneve të proteinave dhe kripërave thjesht, shpejt dhe ekonomikisht.

Siç e dimë të gjithë, A260 do të thotë vlera OD e përthithjes së acidit nukleik, A280 do të thotë vlera OD e përthithjes së përqendrimit të proteinave, A230 do të thotë përthithje e përqendrimit të joneve të kripës, vlerën OD, kështu që A260 mund të konvertojë përqendrimin e acidit nukleik, A260/280 do të thotë mbetje proteine, A260/230 do të thotë mbetjet e joneve të kripës bazohen në një rregull të madh, por kjo bazohet në një numër të madh kërkimesh.konvencionaletë besosh se mund të shpjegojë pastërtinë e ADN-së dhe ARN-sënjë masë të caktuar.Nuk është standardi i vetëm për identifikimin e rendimentit dhe pastërtisë së acidit nukleik, ai përdoret vetëm si referencë dhe nuk është një "standard ari".

Manuali Thermo Fisher ND-2000 thekson besueshmërinë e rezultateve të testit

Arsyeja është se rezultatet e marra duke përdorur një spektrofotometër mikro/ultramikro UV pasqyrojnë vetëm rendimentin dhe pastërtinë e acidit nukleik nga ana, dhe ka shumë faktorë ndikues (rruga optike, vëllimi i kampionit, përqendrimi i kampionit, vlera e pH, jone të tjerë që ndikojnë në matjen e absorbimit, etj.), vlera e matur e OD nuk është domosdoshmërisht e saktë.Në të njëjtën kohë, për shkak të mungesës së specifikës së materialit për përcaktimin e vlerës së absorbimit, ADN-ja me një zinxhir, ADN-ja me dy fije, ARN, dNTPs dhe disa proteina kanë të gjitha kulmet e përthithjes në gjatësi vale 260 nm dhe përqendrimi i përcaktuar vetëm nga A260 nuk është domosdoshmërisht ADN-ja ose ARN-ja reale.Përqendrimi, integriteti dhe degradimi i tij nuk mund të gjykohen.

Pra, si të gjykojmë cilësinë e acidit tonë nukleik të pastruar?Përveç përdorimit të një spektrofotometër mikro/ultramikro UV për zbulim, metoda të tilla si elektroforeza e xhelit të agarozës kërkohen gjithashtu për të shfaqur vizualisht pastërtinë dhe integritetin e acidit nukleik dhe për të treguar përqendrimin në një masë të caktuar.Në këtë mënyrë, rendimenti dhe pastërtia e acidit nukleik të marrë nga rezultatet e zbulimit të metodave të ndryshme janë të besueshme.

Krahasimi i grafikut eksperimental

ADN-ja gjenomike e qelizave H1299 u nxor duke përdorur kompletet e nxjerrjes së ADN-së të kompanisë A, dhe u pa kontaminim i konsiderueshëm me papastërti, duke rezultuar në vlera të larta të OD

(Vlera e matjes së OD dhe elektroferogrami përkatës)

Indeksi i vlerësimit

A ka një "standard ari" për rendimentin e acidit nukleik dhe testimin e cilësisë?

Me sa dimë, nuk ka asnjë metodë të thjeshtë, të shpejtë dhe të lirë.Pavarësisht nëse është spektrofotometër, elektroforezë xhel ose spektrometri e masës, të gjitha ato pasqyrojnë përqendrimin dhe pastërtinë e acidit nukleik në tretësirë ​​nga aspekte të ndryshme, dhe ato duhet të gjykohen duke iu referuar njëri-tjetrit.

Indeksi më i mirë i vlerësimit është gjithmonëaplikimi eksperimental pasues.Nuk ndikon në efikasitetin e transkriptimit të kundërt dhe amplifikimit PCR.Marrja e produkteve të besueshme të amplifikimit dhe vlerave të Ct, dhe marrja e një sekuence të plotë me sekuencë është nxjerrja e suksesshme e acidit nukleik.

Për ta përmbledhur, pikëpamja e teorisë vetëm të raportit duhet të sfidohet nga pikëpamja e "përdorimit të rezultateve të mira eksperimentale në rrjedhën e poshtme si parametra të mirë të nxjerrjes"!

Komplete të rekomanduara të nxjerrjes së ADN-së Foregene për të marrë pastërti të lartë të ADN/ARN-së:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/