Antitrupat, të quajtura edhe imunoglobulina (Ig), janë glikoproteina që lidhen në mënyrë specifike me antigjenet.
 
Përgatitja konvencionale e antitrupave prodhohet duke imunizuar kafshët dhe duke mbledhur antiserum.Prandaj, antiserumi zakonisht përmban antitrupa kundër antigjeneve të tjerë të palidhur dhe përbërësve të tjerë proteinikë në serum.Molekulat e përgjithshme të antigjenit kryesisht përmbajnë epitope të shumta të ndryshme, kështu që antitrupat konvencionalë janë gjithashtu një përzierje e antitrupave kundër epitopeve të shumta të ndryshme.Edhe antitrupat konvencionale të serumit të drejtuara kundër të njëjtit epitop janë ende të përbëra nga antitrupa heterogjenë të prodhuar nga klone të ndryshëm të qelizave B.Prandaj, antitrupat konvencionale të serumit quhen gjithashtu antitrupa poliklonalë, ose shkurtimisht antitrupa poliklonalë.
 
Antitrupi monoklonal (antitrupi monoklonal) është një antitrup shumë uniform i prodhuar nga një klon i vetëm i qelizave B dhe i drejtuar vetëm kundër një epitopi specifik.Zakonisht përgatitet nga teknologjia e hibridomës - teknologjia e antitrupave hibridoma bazohet në teknologjinë e shkrirjes së qelizave, duke kombinuar qelizat B me aftësinë për të sekretuar antitrupa specifikë dhe qeliza mielomë me kapacitet të pafund rritjeje në hibridomat e qelizave B.Kjo qelizë hibridome ka karakteristikat e një qelize mëmë.Mund të përhapet pafundësisht dhe pavdekshëm in vitro si qelizat e mielomës, dhe mund të sintetizojë dhe sekretojë antitrupa specifikë si limfocitet shpretke.Nëpërmjet klonimit, mund të merret një linjë monoklonale që rrjedh nga një qelizë e vetme hibridome, domethënë një linjë qelizore hibridome.Antitrupat që prodhon janë antitrupa shumë homogjenë kundër të njëjtit përcaktues antigjenik, domethënë antitrupave monoklonale.
 
Antitrupat ekzistojnë si një ose më shumë monomerë në formë Y (d.m.th., antitrupa monoklonale ose antitrupa poliklonalë).Çdo monomer në formë Y përbëhet nga 4 zinxhirë polipeptidikë, duke përfshirë dy zinxhirë identikë të rëndë dhe dy zinxhirë identikë të lehtë.Zinxhiri i lehtë dhe zinxhiri i rëndë emërtohen sipas peshës së tyre molekulare.Pjesa e sipërme e strukturës në formë Y është rajoni i ndryshueshëm, i cili është vendi i lidhjes së antigjenit.(Fragment nga Koncepti i Antitrupave Bio-Monoklonal Detai)
 
Struktura e antitrupave
Zinxhirë të rëndë
Ekzistojnë pesë lloje të zinxhirëve të rëndë Ig të gjitarëve, të emërtuar me shkronjat greke α, δ, ε, γ dhe μ.Antitrupat përkatës quhen IgA, IgD, IgE, IgG dhe IgM.Zinxhirët e ndryshëm të rëndë ndryshojnë në madhësi dhe përbërje.α dhe γ përmbajnë afërsisht 450 aminoacide, ndërsa μ dhe ε përmbajnë afërsisht 550 aminoacide.
Çdo zinxhir i rëndë ka dy rajone: rajonin konstant dhe rajonin e ndryshueshëm.Të gjithë antitrupat e të njëjtit lloj kanë të njëjtin rajon konstant, por ka dallime midis antitrupave të llojeve të ndryshme.Rajonet konstante të zinxhirëve të rëndë γ, α dhe δ janë të përbëra nga tre domene Ig së bashku, me një rajon të varur për të rritur fleksibilitetin e tij;rajonet konstante të vargjeve të rënda μ dhe ε përbëhen nga 4 domene Ig.Rajoni i ndryshueshëm i zinxhirit të rëndë të antitrupit të prodhuar nga qeliza të ndryshme B është i ndryshëm, por rajoni i ndryshueshëm i antitrupit i prodhuar nga e njëjta qelizë B ose klon qelizor është i njëjtë, dhe rajoni i ndryshueshëm i çdo zinxhiri të rëndë është rreth 110 aminoacide në gjatësi., Dhe formoni një domen të vetëm Ig.
 
Zinxhiri i lehtë
Ekzistojnë vetëm dy lloje zinxhirësh të lehtë tek gjitarët: lloji lambda dhe lloji kappa.Çdo zinxhir i lehtë ka dy fusha të lidhura: një rajon konstant dhe një rajon të ndryshueshëm.Gjatësia e zinxhirit të lehtë është rreth 211-217 aminoacide.Dy zinxhirët e lehtë të përfshirë në çdo antitrup janë gjithmonë të njëjtë.Për gjitarët, zinxhiri i lehtë në çdo antitrup ka vetëm një lloj: kappa ose lambda.Në disa vertebrorë të ulët, si peshqit kërcorë (peshqit kërcorë) dhe peshqit kockorë, gjenden gjithashtu lloje të tjera zinxhirësh të lehta si tipi iota (iota).
 
Segmentet Fab dhe Fc
Segmenti Fc mund të kombinohet drejtpërdrejt me enzima ose ngjyra fluoreshente për të etiketuar antitrupat.Është pjesa ku antitrupi ngjitet në pllakë gjatë procesit ELISA, dhe është gjithashtu pjesa ku antitrupi i dytë njihet dhe lidhet në imunoprecipitim, imunoblotting dhe imunohistokimi.Antitrupat mund të hidrolizohen në dy segmente F(ab) dhe një segment Fc nga enzimat proteolitike si papaina, ose ato mund të ndahen nga rajoni i varur nga pepsina dhe të hidrolizohen në një segment F(ab)2 dhe një segment Fc.Fragmentet e antitrupave IgG ndonjëherë janë shumë të dobishme.Për shkak të mungesës së segmentit Fc, segmenti F(ab) nuk do të precipitojë me antigjenin dhe as nuk do të kapet nga qelizat imune në studimet in vivo.Për shkak të fragmenteve të vogla molekulare dhe mungesës së funksionit të ndërlidhjes (për shkak të mungesës së segmentit Fc), segmenti Fab zakonisht përdoret për etiketim me radio në studimet funksionale dhe segmenti Fc përdoret kryesisht si një agjent bllokues në ngjyrosjen histokimike.
 
Rajonet e ndryshueshme dhe konstante
Rajoni i ndryshueshëm (rajoni V) ndodhet në 1/5 ose 1/4 (që përmban rreth 118 mbetje aminoacide) të zinxhirit H pranë skajit N dhe 1/2 (që përmban rreth 108-111 mbetje aminoacide) afër skajit N të zinxhirit L.Çdo rajon V ka një unazë peptide të formuar nga lidhje disulfide brenda zinxhirit dhe çdo unazë peptide përmban afërsisht 67 deri në 75 mbetje aminoacide.Përbërja dhe rregullimi i aminoacideve në rajonin V përcaktojnë specifikën e lidhjes së antigjenit të antitrupit.Për shkak të llojeve dhe sekuencës në ndryshim të aminoacideve në rajonin V, mund të formohen shumë lloje të antitrupave me specifika të ndryshme të antigjenit lidhës.Rajonet V të zinxhirit L dhe zinxhirit H quhen përkatësisht VL dhe VH.Në VL dhe VH, përbërja dhe sekuenca e aminoacideve të disa rajoneve lokale kanë një shkallë më të lartë ndryshimi.Këto rajone quhen rajone hipervariable (HVR).Përbërja dhe rregullimi i aminoacideve të pjesëve jo-HVR në rajonin V janë relativisht konservatore, i cili quhet rajoni kornizë.Ekzistojnë tre rajone hipervariabile në VL, të vendosura zakonisht në mbetjet e aminoacideve përkatësisht 24 deri në 34 dhe 89 deri në 97.Të tre HVR-të e VL dhe VH quhen përkatësisht HVR1, HVR2 dhe HVR3.Hulumtimi dhe analiza e difraksionit të kristalit të rrezeve X vërtetoi se rajoni hipervariable është me të vërtetë vendi ku lidhet antigjeni i antitrupave, kështu që quhet rajoni përcaktues i komplementaritetit (CDR).HVR1, HVR2 dhe HVR3 e VL dhe VH mund të quhen përkatësisht CDR1, CDR2 dhe CDR3.Në përgjithësi, CDR3 ka një shkallë më të lartë të hiperndryshueshmërisë.Rajoni hipervariable është gjithashtu vendndodhja kryesore ku ekzistojnë përcaktuesit idiotipikë të molekulave të Ig.Në shumicën e rasteve, zinxhiri H luan një rol më të rëndësishëm në lidhjen me antigjenin.
Rajoni konstant (rajoni C)ndodhet në 3/4 ose 4/5 (përafërsisht nga aminoacidi 119 në terminalin C) të zinxhirit H pranë terminalit C dhe 1/2 (përmban rreth 105 mbetje aminoacide) pranë skajit C të zinxhirit L.Çdo rajon funksional i zinxhirit H përmban rreth 110 mbetje aminoacide dhe përmban një unazë peptide të përbërë nga 50-60 mbetje aminoacide të lidhura me lidhje disulfide.Përbërja dhe rregullimi i aminoacideve të këtij rajoni janë relativisht konstante në të njëjtin zinxhir të izotipit L të Ig kafshëve dhe të njëjtin zinxhir të tipit H.E njëjta gjë, ajo mund të lidhet vetëm në mënyrë specifike me antigjenin përkatës, por struktura e rajonit të saj C është e njëjtë, domethënë ka të njëjtin antigjenitet.Antitrupi sekondar i kalit kundër IgG-së njerëzore (ose anti-antitrupi) mund të kombinohet me dy Një kombinim i antitrupave (IgG) kundër ekzotoksinave të ndryshme ndodh.Kjo është një bazë e rëndësishme për përgatitjen e antitrupave dytësorë dhe aplikimin e fluoresceinës, izotopeve, enzimave dhe antitrupave të tjerë të etiketuar.
 
 
Produkte të ngjashme:
Kompleti Cell Direct RT-qPCR