FAQ përKompleti i izolimit të ARN-së totale të kafshëve

Analiza e mëposhtme e problemeve që mund të hasninxjerrja e ARN-së e indeve të kafshëve/qelizës will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ARN nuk nxirret ose rendimentet e ARN janë të ulëta

Shpesh ka një sërë faktorësh që ndikojnë në efikasitetin e rikuperimit, të tilla si: përmbajtja e ARN-së e mostrës së indeve, mënyra e funksionimit, vëllimi i elucionit, etj.

1. Gjatë operimit është kryer banjë akulli ose centrifugim kriogjenik (4 °C).

Rekomandim: Punoni në temperaturën e dhomës (15-25°C) gjatë gjithë procesit, mos bëni banjë me akull dhe centrifugoni në temperatura të ulëta.

2. Ruajtja e gabuar e mostrës ose koha e tepërt e ruajtjes së mostrës.

Rekomandim: Ruani mostrat në -80 °C ose ngrini në azot të lëngshëm dhe shmangni përdorimin e përsëritur të ngrirjes-shkrirjes;përpiquni të përdorni inde të freskëta ose qeliza të kultivuara për nxjerrjen e ARN-së.

3. Liza e pamjaftueshme e kampionit.

Rekomandim: Kur homogjenizoni indin, sigurohuni që indi të jetë homogjenizuar mjaftueshëm dhe që qelizat e indeve të jenë të ndara mjaftueshëm për të shpjeguar çlirimin e ARN-së.

4. Eluenti nuk është shtuar saktë.

Rekomandim: Konfirmoni që ddH pa RNase₂O shtohet pika-pikisht në mes të membranës së kolonës së pastrimit.

5. Vëllimi i saktë i etanolit absolut nuk iu shtua Buffer RL2 ose Buffer RW2.

Rekomandim: Ndiqni udhëzimet, shtoni volumin e saktë të etanolit absolut në Buffer RL2 dhe Buffer RW2 dhe përzieni mirë përpara se të përdorni kompletin.

6. Doza e mostrës së indit nuk është e përshtatshme.

Rekomandim: Përdorni 10-20 mg inde ose (1-5) × 10⁶qelizat për 500 μl tampon RL1, pasi përdorimi i tepërt i indeve mund të rezultojë në ekstraktim të reduktuar të ARN-së.

7. Vëllimi jo i duhur i elucionit ose elucioni jo i plotë.

Rekomandim: Vëllimi i elucionit të kolonës së pastrimit është 50-200 μl;nëse efekti i elucionit nuk është i kënaqshëm, rekomandohet të zgjatet koha e vendosjes në temperaturën e dhomës pas shtimit të ddH të parangrohur pa RNase₂O, p.sh. për 5-10 min.

8. Kolona e pastrimit ka mbetje etanoli pas larjes me Buffer RW2.

Rekomandim: Nëse ka mbetje etanoli pas larjes me tampon RW2, centrifugimi me tub bosh për 1min, koha për centrifugimin e tubit bosh mund të rritet në 2min ose kolona e pastrimit mund të vendoset në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të hequr në mënyrë adekuate etanolin e mbetur.

ARN-ja e pastruar degradohet

Cilësia e ARN-së së pastruar lidhet me faktorë të tillë si ruajtja e kampionit, ndotja me RNase dhe manipulimi, etj.

1. Mostrat e indeve nuk mbahen në kohë.

Rekomandim: Nëse mostrat e indeve ose qelizat nuk përdoren në kohën e duhur pas grumbullimit, kriokonservoni menjëherë në -80 °C ose azot të lëngët.Për të nxjerrë ARN, përdorni një mostër indi ose qelize të sapomarrur sa herë që është e mundur.

2. Ngrirja-shkrirja e përsëritur e mostrave të indeve.

Rekomandim: Kur ruani mostrat e indeve, është mirë që ato të priten në copa të vogla për t'u ruajtur dhe të hiqni njërën prej tyre kur i përdorni për të shmangur ngrirje-shkrirjen e përsëritur të mostrës dhe degradimin e ARN-së.

3. RNase është futur ose jo duke përdorur doreza, maska, etj. gjatë operacionit.

Rekomandim: Eksperimentet e nxjerrjes së ARN-së kryhen më së miri në dhoma të veçanta të manipulimit të ARN-së dhe tabela pastrohet përpara eksperimentit.

Vishni doreza dhe maska ​​të disponueshme gjatë eksperimentit për të minimizuar degradimin e ARN-së të shkaktuar nga futja e RNase.

4. Reagentët kontaminohen me RNase gjatë përdorimit.

Rekomandim: Zëvendësoni me një komplet të ri të izolimit të ARN-së totale të kafshëve për eksperimentet përkatëse.

5. Tubat e centrifugës, majat, etj. të përdorura në manipulimin e ARN-së janë të kontaminuara me RNase.

Rekomandim: Konfirmoni që tubat e centrifugës, majat, pipetat, etj. të përdorura në nxjerrjen e ARN-së janë të gjitha pa RNase.

ARN-ja e përftuar e pastruar ndikon në eksperimentet në rrjedhën e poshtme

ARN pastrohet nga kolona e pastrimit, nëse jonet e kripës, përmbajtja e proteinave është shumë e madhe do të ndikojë në eksperimentin në rrjedhën e poshtme, të tilla si: transkriptimi i kundërt,Northern Blot et al.

1. ARN e elutuar ka mbetje jonesh kripe.

Rekomandim: Konfirmoni që vëllimi i saktë i etanolit është shtuar në Buffer RW2 dhe kryeni 2 larje të kolonave të pastrimit me shpejtësinë centrifugale të treguar për funksionim;nëse ka mbetje jonesh kripe, lëreni kolonën e pastrimit në Buffer RW2 për 5 minuta në temperaturën e dhomës dhe kryeni centrifugimin për të maksimizuar heqjen e ndotjes me kripë.

2. Mbetja e etanolit në ARN të elutuar.

Rekomandim: Konfirmoni që pas larjes me tampon RW2, kryeni operacionin e centrifugimit të tubit bosh me shpejtësinë e centrifugimit të treguar për funksionim, rrisni kohën e centrifugimit të tubit të zbrazët në 2 minuta nëse ka ende mbetje etanoli, ose lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta pas centrifugimit të tubit të zbrazët për të maksimizuar heqjen e centrifugimit të tubit bosh.

Izolimi i llojeve të mostrave të acidit nulceik

Kompletet e izolimit të ARN-së të Foregene mund të marrin izolimin/ekstraktimin total të ARN-së nga burimet e mëposhtme të mostrave: Indet e kafshëve, bimët, qelizat, virale, gjaku, etj.

Si ta ruaj kompletin

Ruajtja në temperaturën e dhomës për 24 muaj.