Kompleti i izolimit total të ARN-së së kafshëve Komplete për nxjerrjen dhe pastrimin total të ARN-së për indet dhe qelizat e kafshëve
Përshkrimi i kompletit:
Ekstraktoni shpejt dhe me efikasitet ARN totale me pastërti të lartë dhe me cilësi të lartë nga inde të ndryshme të kafshëve.
Nuk ka nevojë të shqetësoheni për degradimin e ARN-së.I gjithë sistemi është pa RNase
Hiqni në mënyrë efektive ADN-në duke përdorur kolonën e pastrimit të ADN-së
Hiq ADN-në pa shtuar DNase
E thjeshtë - të gjitha operacionet kryhen në temperaturën e dhomës
I shpejtë—operimi mund të përfundojë në 30 minuta
I sigurt - nuk përdoret reagent organik
Pastërti e lartë-OD260/280≈1.8-2.1
Përshkrimet e kompleteve
50 Përgatitje, 200 Përgatitje
Ky komplet përdorkolona dhe formula e rrotullimite zhvilluar nga kompania jonë, e cila mund të nxjerrë ARN totale me pastërti të lartë dhe me cilësi të lartë nga inde të ndryshme shtazore me efikasitet të lartë. Ofron një kolonë efikase të pastrimit të ADN-së, e cila mund të ndajë dhe absorbojë lehtësisht ADN-në gjenomike nga supernatanti dhe lizati i indeve, i thjeshtë dhe që kursen kohë;Kolona vetëm me ARN mund të lidhë ARN në mënyrë efikase dhe mund të përpunohet njëkohësisht me një formulë unike Shumë mostra.
I gjithë sistemi është pa RNase, në mënyrë që ARN-ja e nxjerrë të mos degradohet;Buffer RW1, Buffer RW2 sistem larjeje buferike, në mënyrë që ARN-ja e përftuar të jetë pa proteina, ADN, jone dhe ndotje organike.
Komponentët e kompletit
| Kompleti i izolimit total të ARN-së së Kafshëve | ||
| Komponentët e kompletit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH2O pa RNase | 10 ml | 40 ml |
| Kolona vetëm me ARN | 50 | 200 |
| Kolona për pastrimin e ADN-së | 50 | 200 |
| Manuali i Udhëzimeve | 1 copë | 1 copë |
Informacioni i produktit
| Formati | Kolona e rrotullimit | Komponenti i pastrimit | Kolona Foregene, reagent |
| Fluks | 1-24 mostra | Koha për përgatitje | ~ 30 min (24 mostra) |
| Centrifuga | Centrifugë tavoline | Ndarja me pirolizë | Ndarja centrifugale |
| Mostra | Inde shtazore;qelizë | Sasia e mostrave | Indi:10-20 mg;Qeliza:(1-5)×106 |
| Vëllimi i elucionit | 50-200 μL | Vëllimi maksimal i ngarkimit | 850 μL |
Karakteristikat dhe avantazhet
■ Nuk ka nevojë të shqetësoheni për degradimin e ARN-së;i gjithë sistemi është pa RNase
■ Hiqni në mënyrë efektive kolonën e pastrimit të ADN-së që përdor ADN-në
■ Hiqni ADN-në pa shtuar DNase
■ Të gjitha veprimet e thjeshta përfundojnë në temperaturën e dhomës
■ Funksionimi i shpejtë mund të përfundojë në 30 minuta
■ I sigurt - nuk kërkohet reagent organik
■ Pastërti e lartë -OD260/280≈1.8-2.1
Aplikimi i kompletit
Është i përshtatshëm për nxjerrjen dhe pastrimin e ARN-së totale nga një shumëllojshmëri e indeve të kafshëve të freskëta ose të ngrira ose qelizave të kultivuara.
Parametrat e produktit
■ Aplikimet në rrjedhën e poshtme: sinteza e cDNA-së me vargun e parë, RT-PCR, klonimi molekular, Northern Blot, etj.
■ Mostrat: indet e kafshëve, qelizat e kultivuara
■ Dozimi: Indet 10-20mg, Qeliza(2-5)×106
■ Kapaciteti maksimal i lidhjes së ADN-së të kolonës së pastrimit: 80 μg
■ Vëllimi i elucionit: 50-200 μl
Diagramë
Kompleti i izolimit të ARN-së totale të kafshëve i trajtuar 20 mg
Mostrat e freskëta të miut, merrni 5% ARN totale të pastruar 1% agar
Elektroforeza e glikogelit
1: Shpretka 2: Veshka
3: Mëlçia 4: Zemra
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
Kompleti mund të ruhet për 24 muaj në temperaturën e dhomës (15–25 ℃) ose 2–8 ℃ për një kohë më të gjatë.Buferi RL1 mund të ruhet në 4 ℃ për 1 muaj pas shtimit të β-merkaptoetanolit (opsionale).
Artikujt e cituar
1.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., etj.Nanogrimca të ngjashme me lipidet e ngarkuara me mRNA për modifikimin e bazës së mëlçisë nëpërmjet optimizimit të dizajnit të përbërë qendror.Adv.Funksioni.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, etj.Apoptoza spontane e qelizave në përgatitjen terapeutike të qelizave burimore ushtron efekte imunomoduluese nëpërmjet çlirimit të fosfatidilserinës.Synimi i transduktit të sinjalit atje.2021 korrik 14; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, etj.Modifikimi i tARN-së N7-metilguanozinës rrit përkthimin onkogjenik të mARN-së dhe nxit progresionin intrahepatik të kolengiokarcinomës.Qeliza mol.2021 korrik 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, etj.Modifikimi m6A i ndërmjetësuar nga Mettl14 Lehtëson rigjenerimin e mëlçisë duke ruajtur homeostazën e rrjetës endoplazmatike.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021; 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kompletet e izolimit të ARN-së për burime të tjera të mostrësjanë në dispozicion:
Qeliza, bimore, virale, gjaku etj.
ARN nuk nxirret ose rendimentet e ARN janë të ulëta
Shpesh ka një sërë faktorësh që ndikojnë në efikasitetin e rikuperimit, të tilla si: përmbajtja e ARN-së e mostrës së indeve, mënyra e funksionimit, vëllimi i elucionit, etj.
1. Gjatë operimit është kryer banjë akulli ose centrifugim kriogjenik (4 °C).
Rekomandim: Punoni në temperaturën e dhomës (15-25°C) gjatë gjithë procesit, mos bëni banjë me akull dhe centrifugoni në temperatura të ulëta.
2. Ruajtja e gabuar e mostrës ose koha e tepërt e ruajtjes së mostrës.
Rekomandim: Ruani mostrat në -80 °C ose ngrini në azot të lëngshëm dhe shmangni përdorimin e përsëritur të ngrirjes-shkrirjes;përpiquni të përdorni inde të freskëta ose qeliza të kultivuara për nxjerrjen e ARN-së.
3. Liza e pamjaftueshme e kampionit.
Rekomandim: Kur homogjenizoni indin, sigurohuni që indi të jetë homogjenizuar mjaftueshëm dhe që qelizat e indeve të jenë të ndara mjaftueshëm për të shpjeguar çlirimin e ARN-së.
4. Eluenti nuk është shtuar saktë.
Rekomandim: Konfirmoni që ddH pa RNase2O shtohet pika-pikisht në mes të membranës së kolonës së pastrimit.
5. Vëllimi i saktë i etanolit absolut nuk iu shtua Buffer RL2 ose Buffer RW2.
Rekomandim: Ndiqni udhëzimet, shtoni volumin e saktë të etanolit absolut në Buffer RL2 dhe Buffer RW2 dhe përzieni mirë përpara se të përdorni kompletin.
6. Doza e mostrës së indit nuk është e përshtatshme.
Rekomandim: Përdorni 10-20 mg inde ose (1-5) × 106qelizat për 500 μl tampon RL1, pasi përdorimi i tepërt i indeve mund të rezultojë në ekstraktim të reduktuar të ARN-së.
7. Vëllimi jo i duhur i elucionit ose elucioni jo i plotë.
Rekomandim: Vëllimi i elucionit të kolonës së pastrimit është 50-200 μl;nëse efekti i elucionit nuk është i kënaqshëm, rekomandohet të zgjatet koha e vendosjes në temperaturën e dhomës pas shtimit të ddH të parangrohur pa RNase2O, p.sh. për 5-10 min.
8. Kolona e pastrimit ka mbetje etanoli pas larjes me Buffer RW2.
Rekomandim: Nëse ka mbetje etanoli pas larjes me tampon RW2, centrifugimi me tub bosh për 1min, koha për centrifugimin e tubit bosh mund të rritet në 2min ose kolona e pastrimit mund të vendoset në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të hequr në mënyrë adekuate etanolin e mbetur.
ARN-ja e pastruar degradohet
Cilësia e ARN-së së pastruar lidhet me faktorë të tillë si ruajtja e kampionit, ndotja me RNase dhe manipulimi, etj.
1. Mostrat e indeve nuk mbahen në kohë.
Rekomandim: Nëse mostrat e indeve ose qelizat nuk përdoren në kohën e duhur pas grumbullimit, kriokonservoni menjëherë në -80 °C ose azot të lëngët.Për të nxjerrë ARN, përdorni një mostër indi ose qelize të sapomarrur sa herë që është e mundur.
2. Ngrirja-shkrirja e përsëritur e mostrave të indeve.
Rekomandim: Kur ruani mostrat e indeve, është mirë që ato të priten në copa të vogla për t'u ruajtur dhe të hiqni njërën prej tyre kur i përdorni për të shmangur ngrirje-shkrirjen e përsëritur të mostrës dhe degradimin e ARN-së.
3. RNase është futur ose jo duke përdorur doreza, maska, etj. gjatë operacionit.
Rekomandim: Eksperimentet e nxjerrjes së ARN-së kryhen më së miri në dhoma të veçanta të manipulimit të ARN-së dhe tabela pastrohet përpara eksperimentit.
Vishni doreza dhe maska të disponueshme gjatë eksperimentit për të minimizuar degradimin e ARN-së të shkaktuar nga futja e RNase.
4. Reagentët kontaminohen me RNase gjatë përdorimit.
Rekomandim: Zëvendësoni me një komplet të ri të izolimit të ARN-së totale të kafshëve për eksperimentet përkatëse.
5. Tubat e centrifugës, majat, etj. të përdorura në manipulimin e ARN-së janë të kontaminuara me RNase.
Rekomandim: Konfirmoni që tubat e centrifugës, majat, pipetat, etj. të përdorura në nxjerrjen e ARN-së janë të gjitha pa RNase.
ARN-ja e përftuar e pastruar ndikon në eksperimentet në rrjedhën e poshtme
ARN pastrohet nga kolona e pastrimit, nëse jonet e kripës, përmbajtja e proteinave është shumë e madhe do të ndikojë në eksperimentin në rrjedhën e poshtme, të tilla si: transkriptimi i kundërt,Northern Blot et al.
1. ARN e elutuar ka mbetje jonesh kripe.
Rekomandim: Konfirmoni që vëllimi i saktë i etanolit është shtuar në Buffer RW2 dhe kryeni 2 larje të kolonave të pastrimit me shpejtësinë centrifugale të treguar për funksionim;nëse ka mbetje jonesh kripe, lëreni kolonën e pastrimit në Buffer RW2 për 5 minuta në temperaturën e dhomës dhe kryeni centrifugimin për të maksimizuar heqjen e ndotjes me kripë.
2. Mbetja e etanolit në ARN të elutuar.
Rekomandim: Konfirmoni që pas larjes me tampon RW2, kryeni operacionin e centrifugimit të tubit bosh me shpejtësinë e centrifugimit të treguar për funksionim, rrisni kohën e centrifugimit të tubit të zbrazët në 2 minuta nëse ka ende mbetje etanoli, ose lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta pas centrifugimit të tubit të zbrazët për të maksimizuar heqjen e centrifugimit të tubit bosh.
