Kompleti i izolimit total të ARN-së së bimëve Plus Kompleti i Purificaiton i ARN-së totale për bimë të pasura me polisakaride dhe polifenole
Përshkrimi i kompletit:
Kat.Nr.RE-05021/05022/05024
Për pastrimin e ARN-së totale nga mostrat e përgjithshme të bimëve që përmbajnë përbërës të lartë polisaharid dhe polifenol.
Ekstraktoni shpejt ARN totale me cilësi të lartë nga mostrat e bimëve me përmbajtje të lartë polisaharidesh dhe polifenolesh.
Pa RNase duke përdorur kolonën për pastrimin e ADN-së
E thjeshtë - të gjitha operacionet kryhen në temperaturën e dhomës
I shpejtë—operimi mund të përfundojë në 30 minuta
I sigurt - nuk përdoret reagent organik 
Specifikimet
50 Përgatitje, 200 Përgatitje
Kompleti përdor kolonën e rrotullimit dhe formulën e zhvilluar nga Foregene, e cila mund të nxjerrë në mënyrë efikase ARN totale me pastërti të lartë dhe me cilësi të lartë nga inde të ndryshme bimore me përmbajtje të lartë polisaharide ose polifenole.Ai siguron kolonën e pastrimit të ADN-së që mund të heqë lehtësisht ADN-në gjenomike nga supernatanti dhe lizati i indeve.Kolona vetëm me ARN mund të lidhë ARN në mënyrë efektive.Kompleti mund të përpunojë një numër të madh mostrash në të njëjtën kohë.
I gjithë sistemi nuk përmban RNase, kështu që ARN-ja e pastruar nuk do të degradohet.Buferi PRW1 dhe buferi PRW2 mund të sigurojnë që ARN-ja e përftuar të mos kontaminohet nga proteinat, ADN-ja, jonet dhe komponimet organike.
Komponentët e kompletit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| DdH pa RNase2O, Kolona për pastrimin e ADN-së |
| ARN-Vetëm Kolona |
Karakteristikat dhe avantazhet
■ Funksionimi në temperaturën e dhomës (15-25℃) gjatë gjithë procesit, pa banjë akulli dhe centrifugim me temperaturë të ulët.
■ Kompleti i plotë pa RNase, nuk ka nevojë të shqetësoheni për degradimin e ARN-së.
■ Veçanërisht i përshtatshëm për pastrimin e ARN-së nga mostrat bimore të polisaharideve dhe polifenoleve.
■ Kolona e pastrimit të ADN-së lidhet në mënyrë specifike me ADN-në, në mënyrë që kompleti të mund të heqë kontaminimin gjenomik të ADN-së pa shtuar DNase.
■ Rendiment i lartë i ARN-së: vetëm me ARN Kolona dhe formula unike mund të pastrojnë në mënyrë efikase ARN-në.
■ Shpejtësia e shpejtë: e lehtë për t'u përdorur dhe mund të kryhet brenda 30 minutave.
■ Siguria: nuk kërkohet reagent organik.
■ Cilësi e lartë: Fragmentet e ARN-së të pastruar janë të pastërtisë së lartë, pa proteina dhe papastërti të tjera dhe mund të përmbushin aplikime të ndryshme eksperimentale në rrjedhën e poshtme.
Parametrat e produktit
■ Aplikimet në rrjedhën e poshtme: sinteza e cDNA-së me vargun e parë, RT-PCR, klonimi molekular, Northern Blot, etj.
■ Mostra: Inde bimore të freskëta ose të ngrira të polisaharideve dhe polifenoleve
■ Dozimi: 50mg ind bimor
■ Kapaciteti maksimal i lidhjes së ARN-së së kolonës së pastrimit: 80 μg
■ Vëllimi i elucionit: 50-200 μl
Aplikimi i kompletit
Është i përshtatshëm për nxjerrjen dhe pastrimin e ARN-së totale nga mostrat e indeve bimore të freskëta ose të ngrira (veçanërisht indet e freskëta të gjetheve të bimëve) me përmbajtje të lartë polisakaride dhe polifenol.
Rrjedha e punës
Diagramë
Plant Total ARN Isolation Kit Plus përpunoi 50 mg gjethe të freskëta të polisaharideve dhe polifenoleve dhe ARN e pastruar 5% u testua me elektroforezë.
1: Banane
2: Xhinko
3: Pambuk
4: Shegë
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
Ky komplet mund të ruhet për 24 muaj në kushte të thata në temperaturë dhome (15-25℃);nëse duhet të ruhet për një kohë më të gjatë, mund të ruhet në 2–8℃.
Buferi PSL1 mund të vendoset në 4℃ për 1 muaj pas shtimit të β-merkaptoetanolit (rekomandohet të shtohet në të njëjtën kohë eksperimenti).
Kolona u mbyll
Pas mbylljes së kolonës, rendimenti i ARN-së zvogëlohet ose madje është i pamundur të pastrohet ARN, dhe masa e ARN-së e marrë është e ulët.
Analiza e shkaqeve të zakonshme:
1. Pushimet e mostrave nuk janë të plota.
Thyerja e kampionit nuk shkakton bllokimin e plotë të KOLONAVE PËR PASTRIMIN E ADN-së, duke ndikuar në rendimentin dhe cilësinë e ARN-së.Ne rekomandojmë funksionimin e shpejtë të bluarjes në një azot të lëngshëm të mjaftueshëm kur thyeni mostrat, Mundohuni të shtypni murin qelizor të mostrës, membranën qelizore dhe indet e tjera.Për mostrat bimore të polisaharideve të poliolit, ju rekomandojmë të përdorni KIT PLUS për izolimin e ARN-së totale të bimëve.
2. Kur thithet supernatanti i ndarë i mostrës me kolonën e pastrimit të ADN-së, precipitati i mundshëm i fragmentuar i qelizave mund të thithet.
Sedimentet e fragmentuara të qelizave të marra do të shkaktojnë kolonën VETËM-ARN e cila do të bllokohet kur të kryhet operacioni i adsorbimit të ARN-së (shih hapin 6).Ne ju rekomandojmë me kujdes kur thithni këtë supernatant për të shmangur thithjen e mbeturinave qelizore.
3. Sasia fillestare e mostrës është shumë.
Përdorimi i tepërt i mostrës do të rezultojë në fragmentim jo të plotë të mostrës ose lizë jo të plotë të qelizave nga Buffer PSL1, duke rezultuar në bllokimin e kolonës së pastrimit gjatë pastrimit.Kompleti i izolimit të ARN-së totale të bimëve Çdo mostër e vetme operative e pastruar është 50 mg.Për mostrat bimore të polisaharideve të poliolit, ju rekomandojmë të provoni KIT PLUS për izolimin e ARN-së totale të bimëve.
4. Temperatura e centrifugës është shumë e ulët.
I gjithë procesi i izolimit dhe pastrimit të ARN-së kryhet në temperaturën e dhomës (20-25°C), përveç se indi i mostrës është thyer nga azoti i lëngshëm. Temperatura e disa centrifugave kriogjenike është më e ulët se 20℃, e cila mund të shkaktojë bllokim të kolonës së pastrimit të ADN-së dhe/ose kolonës vetëm me ARN.Nëse kjo ndodh, vendosni temperaturën e centrifugës në 20-25℃, dhesigurohuni që përzierja e lizës dhe/ose supernatanti i shtuar me etanol të jetë ngrohur paraprakisht në 37°C.
Asnjë ARN nuk është nxjerrë ose rendimenti i ARN-së është i ulët
Zakonisht ka shumë faktorë që ndikojnë në efikasitetin e rikuperimit, si: përmbajtja e ARN-së së mostrës, mënyra e funksionimit, vëllimi i elucionit, etj.
Analiza e shkaqeve të zakonshme si më poshtë:
1. Gjatë operacionit është kryer një banjë akulli ose centrifugim në temperaturë të ulët (4°C).
Sugjerim: Punoni në temperaturën e dhomës (15-25°C) në të gjithë procesin, mos bëni banjë akulli dhe centrifugim në temperaturë të ulët.
2. ARN është degraduar për shkak të ruajtjes jo të duhur të kampionit ose ruajtjes afatgjatë të kampionit.
Rekomandim: Mostrat e sapo mbledhura duhet të ngrihen shpejt në azot të lëngshëm dhe më pas të ruhen në -80°C për një kohë të gjatë, të shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e përsëritur të mostrave;ose njomni menjëherë mostrat në tretësirën e stabilizatorit të ARN-së RNA më vonë (mostrat e kafshëve).
3.Fragmentimi dhe liza e pamjaftueshme e mostrës çojnë në bllokimin e kolonës së pastrimit.
Sugjerim: Kur bluani indet, ju lutemi sigurohuni që indi është bluar mjaftueshëm dhe transferojeni shpejt në tampon PSL1 të përgatitur paraprakisht (konfirmoni që proporcioni i saktë i β-ME është shtuar, shihni hapin 1 të procedurës).
4.Eluenti është shtuar gabimisht.
Sugjerim: Sigurohuni që ddH2O pa RNase të hidhet në mes të membranës së kolonës së pastrimit.
5. Vëllimi i saktë i etanolit absolut nuk iu shtua Buffer PSL2 ose Buffer PRW2.
Sugjerim: Ju lutemi ndiqni udhëzimet, shtoni volumin e saktë të etanolit absolut në Buffer PSL2 dhe Buffer PRW2 dhe përzieni mirë përpara se të përdoret kompleti.
6. Sasia e mostrës së indeve është e papërshtatshme.
Sugjerim: Përdorni 50 mg ind për 500 μl Buffer PSL1.Përdorimi i shumë indeve do të zvogëlojë sasinë e ARN-së së nxjerrë dhe pastërtia e ARN-së që rezulton gjithashtu do të reduktohet.Ne rekomandojmë fuqimisht që doza fillestare e mostrës nuk duhet të kalojë 50 mg për operacion të nxjerrjes së ARN-së.
7.Vëllimi i papërshtatshëm i elucionit ose elucioni jo i plotë.
Sugjerim: Vëllimi i eluentit të kolonës së pastrimit është 50-200 μl;nëse efekti i elucionit nuk është i kënaqshëm, rekomandohet zgjatja e kohës në temperaturën e dhomës pas shtimit të ddH2O të ngrohur pa RNase, si p.sh. 5-10 min.
8. Kolona e pastrimit ka mbetje etanoli pas larjes me BufferPRW2.
Sugjerim: Nëse tubi i zbrazët centrifugohet për 1 min dhe ka mbetur ende etanol pas larjes në tampon PRW2, mund ta rrisni kohën e centrifugimit të tubit bosh në 2 min, ose ta vendosni kolonën e pastrimit në temperaturën e dhomës për 5 min për të hequr plotësisht etanolin e mbetur.
9. Kompleti është përdorur gabimisht.
Sugjerim: Për mostrat bimore të polisaharideve polifenolike, përdorimi i kompleteve të zakonshme si Kompleti i izolimit të ARN totale të bimëve mund të mos jetë në gjendje të marrë mostra ideale të ARN-së.Ne ju rekomandojmë të përdorni Plant Total RNA IsolationKit Plus, i cili është krijuar posaçërisht për mostrat e bimëve polifenolike polisakaride.Një komplet i zhvilluar posaçërisht për nxjerrjen e ARN-së nga mostrat e bimëve të polifenolit dhe polisaharidit.
Vlera OD260/OD280 është e ulët
Elucioni i ARN-së me ddH2O dhe i përdorur për leximet e spektrofotometrit rezulton në vlera të ulëta OD260/OD280.Ne rekomandojmë përdorimin e 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (në vend të ddH2O pa RNase për të elutuar ARN) për të marrë vlera relativisht të sakta OD260/OD280, shihni “Analizat e përqendrimit dhe pastrimit të ARN” në faqen 19.
ARN-ja e pastruar degradohet
Cilësia e ARN-së së pastruar lidhet me faktorë të tillë si ruajtja e mostrës, kontaminimi me RNase dhe manipulimi.
Analiza e shkaqeve të zakonshme:
1. Mostrat e indeve nuk u ruajtën në kohë pas grumbullimit.
Rekomandim: Nëse mostrat e indeve nuk përdoren në kohë pas grumbullimit, ju lutemi ruani ato në azot të lëngshëm në temperaturë të ulët menjëherë ose transferojini në -80°C për ruajtje afatgjatë pas ngrirjes së shpejtë në azot të lëngshëm, ose zhytni menjëherë kampionët në tretësirën e stabilizuesit të ARN-së RNA më vonë (mostrat e kafshëve ).Për nxjerrjen e ARN-së, përpiquni të përdorni mostrat e indeve të mbledhura fllad.
2.Ngrirja dhe shkrirja e përsëritur e mostrave të indeve.
Sugjerim: Gjatë ruajtjes së mostrave të indeve, është mirë që ato të priten në copa të vogla për t'u ruajtur dhe të hiqet një pjesë e tyre kur i përdorni për të shmangur degradimin e ARN-së të shkaktuar nga ngrirja dhe shkrirja e përsëritur e mostrave.
3.RNase futet në sallën e operacionit ose nuk përdoren doreza njëpërdorimshe, maska, etj.
Sugjerim: Eksperimentet e nxjerrjes së ARN-së kryhen më së miri në operacione të veçanta të ARN-së dhe tabela e laboratorit duhet të pastrohet përpara eksperimentit dhe gjatë eksperimentit duhet të vishen doreza dhe maska njëpërdorimshme për të shmangur degradimin e ARN-së të shkaktuar nga futja e RNase në masën më të madhe.
4. Reagenti kontaminohet nga RNase gjatë përdorimit.
Sugjerim: Zëvendësoni me një seri të re komplete të nxjerrjes së ARN-së totale të bimëve për eksperimentet përkatëse.
5. Tubat e centrifugës dhe majat e pipetës që përdoren për manipulimin e ARN-së janë të kontaminuara me RNase.
Sugjerim: Sigurohuni që tubat e centrifugës, majat e pipetave, pipetat, etj. të përdorura në nxjerrjen e ARN-së janë të gjitha pa RNase.
Manualet e udhëzimeve:
Manuali i Udhëzimeve të Kompletit të Izolimit të ARN-së totale të bimëve Plus
