Kompleti i izolimit të ARN-së totale të qelizave Komet e pastrimit të izolimit total të ARN-së nga qeliza
Përshkrimi i kompletit:
ARN totale shumë e pastruar dhe me cilësi të lartë mund të merret nga qeliza të ndryshme të kultivuara në 11 minuta.
Pa RNase
Punohet në temperaturën e dhomës (15-25℃)
Me kolonë për pastrimin e ADN-së
Rendiment i lartë i ARN-së
Shpejtë: Përfundoni nxjerrjen në 11 minuta
Siguria: Asnjë Kimike organike
Përshkrim
Ky komplet përdor kolonën e rrotullimit dhe formulën e zhvilluar nga Foregene, e cila mund të nxjerrë në mënyrë efikase ARN totale me pastërti të lartë dhe me cilësi të lartë nga qelizat e kultivuara në pllaka 96, 24, 12 dhe 6 pusesh.
Kompleti siguron një kolonë efikase për pastrimin e ADN-së, e cila mund të ndajë lehtësisht supernatantin dhe lizatin qelizor, të lidh dhe të heqë ADN-në gjenomike.Operacioni është i thjeshtë dhe kursen kohë.
Tai kolona vetëm me ARN mund të lidhë ARN në mënyrë efikase me një formulë unike.Një numër i madh mostrash mund të përpunohen njëkohësisht.
Komponentët e kompletit
| Përbërja e kompletit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Bufer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Bufer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH2O pa RNase | 10 ml | 40 ml |
| ARN-Vetëm Kolona | 50 | 200 |
| Kolona për pastrimin e ADN-së | 50 | 200 |
| Udhëzim | 1 | 1 |
*Ju lutemi vishni doreza dhe merrni masa mbrojtëse gjatë operimit pasi Buffer cRL1 dhe Buffer RW1 përmbajnë kripëra kaotropike irrituese.
Karakteristikat dhe avantazhet
■ I gjithë procesi operohet në temperaturën e dhomës (15-25℃), pa banjë akulli dhe centrifugim me temperaturë të ulët.
■ I gjithë kompleti është pa RNase, nuk ka nevojë të shqetësoheni për degradimin e ARN-së.
■ Kolona e pastrimit të ADN-së lidh në mënyrë specifike ADN-në, në mënyrë që kompleti të mund të heqë kontaminimin gjenomik të ADN-së pa shtuar DNazë shtesë.
■ Rendiment i lartë i ARN-së: vetëm me ARN Kolona dhe formula unike mund të pastrojnë në mënyrë efikase ARN-në.
■ Shpejtësia e shpejtë: e lehtë për t'u përdorur dhe mund të kryhet në 11 minuta.
■ Siguria: Nuk kërkohet reagent organik.
■ Cilësi e lartë: ARN-ja e pastruar është e pastërtisë së lartë, pa proteina dhe papastërti të tjera dhe mund të përmbushë eksperimente të ndryshme të mëvonshme.
Aplikimi i kompletit
Është i përshtatshëm për nxjerrjen dhe pastrimin e ARN-së totale nga qelizat e kultivuara në pllaka 96, 24, 12 dhe 6 pusesh.
Rrjedha e punës
Diagramë
Diagrami i baterisë së xhelit të agarozës së Celll Total ARN Isolation Kit trajtoi numrat e mësipërm të ndryshëm të qelizave, elucioni 20μl vëllimor, merr 2μl ARN totale të pastruar 1%.
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
Kompleti mund të ruhet për 12 muaj në temperaturën e dhomës (15–25 ℃) ose 2–8 ℃ për një kohë më të gjatë (24 muaj).
Buferi cRL1 mund të ruhet në 4 ℃ për 1 muaj pas shtimit të 2-hidroksi-1-etanetiol (opsionale).
ARN nuk nxirret ose rendimentet e ARN janë të ulëta
Shpesh ka një sërë faktorësh që ndikojnë në efikasitetin e rikuperimit, të tilla si: përmbajtja e ARN-së e mostrës së indeve, mënyra e funksionimit, vëllimi i elucionit, etj.
1. Gjatë operimit është kryer banjë akulli ose centrifugim kriogjenik (4 °C).
Rekomandim: Punoni në temperaturën e dhomës (15-25°C) gjatë gjithë procesit, mos bëni banjë me akull dhe centrifugoni në temperatura të ulëta.
2. Ruajtja e gabuar e mostrës ose koha e tepërt e ruajtjes së mostrës.
Rekomandim: Ruani mostrat në -80 °C ose ngrini në azot të lëngshëm dhe shmangni përdorimin e përsëritur të ngrirjes-shkrirjes;përpiquni të përdorni inde të freskëta ose qeliza të kultivuara për nxjerrjen e ARN-së.
3. Liza e pamjaftueshme e kampionit.
Rekomandim: Kur homogjenizoni indin, sigurohuni që indi të jetë homogjenizuar mjaftueshëm dhe që qelizat e indeve të jenë të ndara mjaftueshëm për të shpjeguar çlirimin e ARN-së.
4. Eluenti nuk është shtuar saktë.
Rekomandim: Konfirmoni që ddH pa RNase2O shtohet pika-pikisht në mes të membranës së kolonës së pastrimit.
5. Vëllimi i saktë i etanolit absolut nuk iu shtua Buffer RL2 ose Buffer RW2.
Rekomandim: Ndiqni udhëzimet, shtoni volumin e saktë të etanolit absolut në Buffer RL2 dhe Buffer RW2 dhe përzieni mirë përpara se të përdorni kompletin.
6. Doza e mostrës së indit nuk është e përshtatshme.
Rekomandim: Përdorni 10-20 mg inde ose (1-5) × 106qelizat për 500 μl tampon RL1, pasi përdorimi i tepërt i indeve mund të rezultojë në ekstraktim të reduktuar të ARN-së.
7. Vëllimi jo i duhur i elucionit ose elucioni jo i plotë.
Rekomandim: Vëllimi i elucionit të kolonës së pastrimit është 50-200 μl;nëse efekti i elucionit nuk është i kënaqshëm, rekomandohet të zgjatet koha e vendosjes në temperaturën e dhomës pas shtimit të ddH të parangrohur pa RNase2O, p.sh. për 5-10 min.
8. Kolona e pastrimit ka mbetje etanoli pas larjes me Buffer RW2.
Rekomandim: Nëse ka mbetje etanoli pas larjes me tampon RW2, centrifugimi me tub bosh për 1min, koha për centrifugimin e tubit bosh mund të rritet në 2min ose kolona e pastrimit mund të vendoset në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të hequr në mënyrë adekuate etanolin e mbetur.
ARN-ja e pastruar degradohet
Cilësia e ARN-së së pastruar lidhet me faktorë të tillë si ruajtja e kampionit, ndotja me RNase dhe manipulimi, etj.
1. Mostrat e indeve nuk mbahen në kohë.
Rekomandim: Nëse mostrat e indeve ose qelizat nuk përdoren në kohën e duhur pas grumbullimit, kriokonservoni menjëherë në -80 °C ose azot të lëngët.Për të nxjerrë ARN, përdorni një mostër indi ose qelize të sapomarrur sa herë që është e mundur.
2. Ngrirja-shkrirja e përsëritur e mostrave të indeve.
Rekomandim: Kur ruani mostrat e indeve, është mirë që ato të priten në copa të vogla për t'u ruajtur dhe të hiqni njërën prej tyre kur i përdorni për të shmangur ngrirje-shkrirjen e përsëritur të mostrës dhe degradimin e ARN-së.
3. RNase është futur ose jo duke përdorur doreza, maska, etj. gjatë operacionit.
Rekomandim: Eksperimentet e nxjerrjes së ARN-së kryhen më së miri në dhoma të veçanta të manipulimit të ARN-së dhe tabela pastrohet përpara eksperimentit.
Vishni doreza dhe maska të disponueshme gjatë eksperimentit për të minimizuar degradimin e ARN-së të shkaktuar nga futja e RNase.
4. Reagentët kontaminohen me RNase gjatë përdorimit.
Rekomandim: Zëvendësoni me një komplet të ri të izolimit të ARN-së totale të kafshëve për eksperimentet përkatëse.
5. Tubat e centrifugës, majat, etj. të përdorura në manipulimin e ARN-së janë të kontaminuara me RNase.
Rekomandim: Konfirmoni që tubat e centrifugës, majat, pipetat, etj. të përdorura në nxjerrjen e ARN-së janë të gjitha pa RNase.
ARN-ja e përftuar e pastruar ndikon në eksperimentet në rrjedhën e poshtme
ARN pastrohet nga kolona e pastrimit, nëse jonet e kripës, përmbajtja e proteinave është shumë e madhe do të ndikojë në eksperimentin në rrjedhën e poshtme, të tilla si: transkriptimi i kundërt,Northern Blot et al.
1. ARN e elutuar ka mbetje jonesh kripe.
Rekomandim: Konfirmoni që vëllimi i saktë i etanolit është shtuar në Buffer RW2 dhe kryeni 2 larje të kolonave të pastrimit me shpejtësinë centrifugale të treguar për funksionim;nëse ka mbetje jonesh kripe, lëreni kolonën e pastrimit në Buffer RW2 për 5 minuta në temperaturën e dhomës dhe kryeni centrifugimin për të maksimizuar heqjen e ndotjes me kripë.
2. Mbetja e etanolit në ARN të elutuar.
Rekomandim: Konfirmoni që pas larjes me tampon RW2, kryeni funksionin e centrifugimit të tubit bosh me shpejtësinë e centrifugimit të treguar për funksionim, rrisni kohën e centrifugimit të tubit të zbrazët në 2 minuta nëse ka ende mbetje etanoli, ose lëreni në temperaturën e dhomës për 5 m.
