Sterilizimi i majave të pipetave dhe tubave EP etj.
1. Përgatitni 0,1% (një të mijtën) DEPC (substancë shumë toksike) me ujë të dejonizuar, përdorni me kujdes në një kapak tymi dhe ruajeni në 4°C larg dritës;
Uji DEPC është ujë i pastër i trajtuar me DEPC dhe i sterilizuar me temperaturë të lartë dhe presion të lartë.Testuar për të qenë pa RNase, DNase dhe proteinazë.
2. Vendosni majën e pipetës dhe tubin EP në 0,1% DEPC dhe sigurohuni që maja e pipetës dhe tubi EP të jenë të mbushura me 0,1% DEP.
3. Mbroni nga drita, lëreni të qëndrojë gjatë natës (12-24 orë)
4. Kutia që përmban majën dhe tubin EP nuk ka nevojë të ngjyhet në DEPC.Pasi të keni hequr përafërsisht ujin DEPC në majë ose në tubin EP, paketoni dhe mbështilleni.
5. 121 gradë Celsius, 30min
6. 180 gradë Celsius, thahet për disa orë (të paktën 3 orë)
Shënim: a.Vishni doreza dhe maska lateksi kur trajtoni DEPC!b, ose pa sterilizim DEPC, 130 ℃, 90 minuta autoklavë (shumë laboratorë sterilizimi me temperaturë të lartë dy herë)
Konsideratat e nxjerrjes së ARN-së
Dy dukuri kryesore të dështimit të izolimit të ARN-së indore
Degradimi i ARN-së dhe mbetjet e papastërtive në inde,në lidhje me degradimin, le të shohim së pari pse ARN-ja e nxjerrë nga qelizat e kultivuara nuk degradohet lehtë.Reagentët ekzistues të ekstraktimit të ARN-së përmbajnë të gjithë përbërës që frenojnë me shpejtësi RNazën.Shtoni lizatin në qelizat e kultivuara dhe thjesht përzieni atë, të gjitha qelizat mund të përzihen plotësisht me lizatin dhe qelizat lizohen plotësisht.Pasi qelizat lizohen, përbërësit aktivë në lizatë frenojnë menjëherë RNazën ndërqelizore, kështu që ARN mbetet e paprekur.Kjo do të thotë, për shkak se qelizat e kultivuara kontaktohen lehtësisht dhe plotësisht me lizatin, ARN-ja e tyre nuk degradohet lehtë;nga ana tjetër, ARN në inde degradohet lehtësisht, sepse qelizat në inde nuk janë të lehta për t'u kontaktuar shpejt me lizatin.për shkak të kontaktit të mjaftueshëm.Kështu që,Duke supozuar se ekziston një mënyrë për ta kthyer indin në një qelizë të vetme duke frenuar aktivitetin e ARN-së, problemi i degradimit mund të zgjidhet plotësisht.
Mulliri me azot të lëngshëm është metoda më efektive e tillë.Megjithatë, metoda e bluarjes së azotit të lëngshëm është shumë e mundimshme, veçanërisht kur numri i mostrave është i madh.Kjo shkaktoi gjënë tjetër më të mirë: homogjenizuesin.TëhomogjenizuesMetoda nuk merr në konsideratë pyetjen se si frenohet aktiviteti i RNase përpara se qelizat të kontaktohen me lizatin, por më tepër lutet që shkalla e përçarjes së indeve të jetë më e shpejtë se shkalla në të cilën RNaza ndërqelizore degradon RN.
Efekti i homogjenizuesit elektrik është më i mirë,dhe efekti i homogjenizuesit të qelqit është i dobët, por në përgjithësi metoda e homogjenizuesit nuk mund të parandalojë fenomenin e degradimit.Prandaj, nëse ekstraktimi është i degraduar, homogjenizuesi elektrik origjinal duhet të përdoret për bluarje me azot të lëngshëm;homogjenizuesi origjinal i qelqit duhet të ndryshohet në një homogjenizues elektrik ose të bluhet drejtpërdrejt me azot të lëngshëm.Problemi është pothuajse 100% i realizueshëm.zgjidhen.
Problemi i mbetjeve të papastërtive që prek eksperimentet e mëvonshme ka shkaqe më të ndryshme sesa degradimi, dhe zgjidhjet janë përkatësisht të ndryshme.Në përfundim,nëse ka degradim ose papastërti të mbetura në inde, metoda/reagenti i nxjerrjes për materialin eksperimental specifik duhet të optimizohet.Nuk është e nevojshme të përdorni mostrat tuaja të çmuara për optimizim: mund të blini disa kafshë të vogla si peshk/pulë nga tregu, të merrni pjesën përkatëse të materialit për nxjerrjen e ARN-së dhe pjesën tjetër për nxjerrjen e proteinave - bluajeni me ekstrakt me gojë, stomak dhe zorrë.
ARN-ja e synuar e ARN-së së nxjerrë përdoret për eksperimente të ndryshme pasuese dhe kërkesat e saj cilësore janë të ndryshme
Ndërtimi i bibliotekës cDNA kërkon integritet të ARN-së pa mbetje të frenuesve të reaksionit enzimë;Northern kërkon integritet më të lartë të ARN-së dhe kërkesa më të ulëta për mbetjet e frenuesve të reaksionit enzimë;RT-PCR nuk kërkon integritet shumë të lartë të ARN-së,por frenon reaksionet enzimatike.Kërkesat për mbetjet janë strikte.Hyrja përcakton daljen;sa herë që qëllimi është të merret ARN me pastërti më të lartë, do t'u kushtojë njerëzve dhe parave.
Mbledhja/Ruajtja e mostrave
Faktorët që ndikojnë në degradimin Pasi kampioni të largohet nga trupi i gjallë/ose mjedisi fillestar i rritjes, enzimat endogjene në kampion do të fillojnë të degradojnë ARN-në,dhe shpejtësia e degradimit lidhet me përmbajtjen e enzimave endogjene dhe temperaturën.Tradicionalisht, ekzistojnë vetëm dy mënyra për të frenuar plotësisht aktivitetin endogjen të enzimës: shtoni lizatin menjëherë dhe homogjenizoni tërësisht dhe shpejt;priteni në copa të vogla dhe ngrini menjëherë në azot të lëngshëm.Të dyja qasjet kërkojnë funksionim të shpejtë.Ky i fundit është i përshtatshëm për të gjitha mostrat, ndërsa i pari është i përshtatshëm vetëm për indet me përmbajtje të ulët të qelizave dhe enzimave endogjene dhe më të lehtë për t'u homogjenizuar.Konkretisht, indet bimore, mëlçia, timusi, pankreasi, shpretka, truri, dhjami, indi muskulor etj. janë më mirë të ngrihen me azot të lëngshëm përpara se të vazhdohet.
Fragmentimi dhe homogjenizimi i mostrave
Faktorët që ndikojnë në degradimin dhe rendimentin Fragmentimi i mostrës ështëpër homogjenizim të plotë, e cila është për çlirimin e plotë dhe të plotë të ARN.Qelizat mund të homogjenizohen drejtpërdrejt pa u thyer.Indet mund të homogjenizohen vetëm pasi të jenë thyer.Majaja dhe bakteret duhet të thyhen me enzimat përkatëse përpara se të homogjenizohen.Indet me përmbajtje më të ulët të enzimës endogjene dhe me homogjenizim më të lehtë mund të grimcohen dhe homogjenizohen në të njëjtën kohë në lizat nga një homogjenizues;indet bimore, mëlçia, timusi, pankreasi, shpretka, truri, dhjami, indi muskulor dhe mostra të tjera, ose janë të larta në enzima endogjene ose nuk homogjenizohen lehtë,kështu që prishja dhe homogjenizimi i indeve duhet të kryhen veçmas.Metoda më e besueshme dhe më produktive e copëtimit është bluarja me azot të lëngshëm, dhe metoda më e besueshme e homogjenizimit është përdorimi i një homogjenizuesi elektrik.Një shënim i veçantë për bluarjen me azot të lëngshëm: mostra nuk duhet të shkrihet gjatë gjithë procesit të bluarjes, pasi enzimat endogjene kanë më shumë gjasa të funksionojnë kur ngrihen.
Zgjedhja e lizatit
Ndikimi në komoditetin e funksionimit dhe faktorët e papastërtive endogjene të mbetura Tretësirat e lizës të përdorura zakonisht mund të pengojnë pothuajse aktivitetin e RNase.Prandaj, pika kryesore e zgjedhjes së një zgjidhje lize është të merret parasysh në kombinim me metodën e pastrimit.Ekziston një përjashtim:mostrat me përmbajtje të lartë enzimash endogjene rekomandohet të përdorin një lizatë që përmban fenol për të rritur aftësinë për të çaktivizuar enzimat endogjene.
Zgjedhja e metodës së pastrimit
Faktorët që ndikojnë në papastërtitë endogjene të mbetura, shpejtësia e nxjerrjes Për mostrat e pastra si qelizat, rezultate të kënaqshme mund të merren pothuajse me çdo metodë pastrimi në dispozicion.Por për shumë mostra të tjera, veçanërisht ato me nivele të larta papastërtish si bimët, mëlçia, bakteret etj., zgjedhja e një metode të përshtatshme pastrimi është vendimtare.Metoda e pastrimit centrifugal të kolonës ka një shpejtësi të shpejtë nxjerrjeje dhe mund të heqë në mënyrë efektive papastërtitë që ndikojnë në reaksionin e mëvonshëm enzimatik të ARN-së, por është e shtrenjtë (Foregene mund të ofrojë komplete me kosto efektive, më shumë detaje klikonikëtu);përdorimi i metodave ekonomike dhe klasike të pastrimit, siç është reshjet e LiCl, mund të marrë gjithashtu rezultate të kënaqshme, por koha e funksionimit është e gjatë..
"Tre disiplina dhe tetë vëmendje" për nxjerrjen e ARN-së
Disiplina 1:Jepini fund kontaminimit të enzimave ekzogjene.
Shënim 1:Vishni rreptësisht maska dhe doreza.
Shënim 2:Tubat e centrifugës, kokat e majës, shufrat e pipetës, rezervuarët e elektroforezës dhe stolat eksperimentale të përfshira në eksperiment duhet të hidhen tërësisht.
Shënim 3:Reagentët/tretësirat e përfshira në eksperiment, veçanërisht uji, duhet të jenë pa RNase.
Disiplina 2:Blloko aktivitetin e enzimave endogjene
Shënim 4:Zgjidhni një metodë të përshtatshme homogjenizimi.
Shënim 5:Zgjidhni një lizatë të përshtatshme.
Shënim 6:Kontrolloni sasinë fillestare të mostrës.
Disiplina 3:Sqaroni qëllimin tuaj të nxjerrjes
Shënim 7:Me çdo sistem të lizatit që i afrohet sasisë maksimale fillestare të mostrës, shkalla e suksesit të nxjerrjes bie ndjeshëm.
Shënim 8:I vetmi kriter ekonomik për nxjerrjen e suksesshme të ARN-së është suksesi në eksperimentet e mëvonshme, jo rendimenti.
10 burimet kryesore të ndotjes me RNase
1. Gishtat janë burimi i parë i enzimeve ekzogjene, ndaj duhen mbajtur dhe zëvendësuar shpesh dorezat.Përveç kësaj, duhet të vishen edhe maska, sepse frymëmarrja është gjithashtu një burim i rëndësishëm i enzimave.Një përfitim shtesë i veshjes së një maske dorezash është mbrojtja e eksperimentuesit.
2. Majat e pipetave, tubat e centrifugës, pipetat – RNaza nuk mund të çaktivizohet vetëm me sterilizimin, kështu që majat e pipetave dhe tubat e centrifugës duhet të trajtohen me DEPC, edhe nëse janë të shënuar si të trajtuar me DEPC.Është mirë të përdorni një pipetë për qëllime të veçanta, fshijeni atë me një pambuk 75% alkool përpara përdorimit, veçanërisht shufrën;përveç kësaj, sigurohuni që të mos përdorni një mbartës të kokës.
3. Uji/buferi duhet të jetë pa ndotje RNase.
4. Të paktën tavolina e testimit duhet të pastrohet me topa pambuku 75% alkool.
5.RNaza endogjene Të gjitha indet përmbajnë enzima endogjene, kështu që ngrirja e shpejtë e indeve me azot të lëngshëm është mënyra më e mirë për të reduktuar degradimin.Metoda e ruajtjes/ bluarjes së azotit të lëngshëm është me të vërtetë e papërshtatshme, por është e vetmja mënyrë për indet me nivele të larta të enzimave endogjene.
6. Mostrat e ARN-së Produktet e nxjerrjes së ARN-së mund të përmbajnë gjurmë të kontaminimit me RNase.
7. Ekstraktimi i plazmidës Ekstraktimi i plazmidës shpesh përdor Rnase për të degraduar ARN-në dhe Rnaza e mbetur duhet të tretet me Proteinazë K dhe të nxirret me PCI.
8. Ruajtja e ARN-së Edhe nëse ruhet në temperaturë të ulët, sasitë gjurmë të RNazës do të shkaktojnë degradim të ARN-së.Zgjidhja më e mirë për ruajtjen afatgjatë të ARN-së është një suspension kripë/alkool, sepse alkooli pengon të gjithë aktivitetin enzimatik në temperatura të ulëta.
9. Kur kationet (Ca, Mg) përmbajnë këto jone, ngrohja në 80C për 5 minuta do të shkaktojë ndarjen e ARN-së, kështu që nëse ARN duhet të nxehet, tretësira e konservimit duhet të përmbajë një agjent kelatues (1mM Citrate Natriumi, pH 6.4).
10. Enzimat e përdorura në eksperimentet e mëvonshme mund të kontaminohen nga RNase.
10 këshilla për nxjerrjen e ARN-së
1: Parandaloni shpejt aktivitetin e RNase.Mostrat ngrihen shpejt pas grumbullimit dhe RNase çaktivizohet nga funksionimi i shpejtë gjatë lizës.
2: Zgjidhni një metodë të përshtatshme ekstraktimi për indet me përmbajtje të lartë ribozimi dhe indi dhjamor është më mirë të përdorni metodën që përmban fenol.
3: Cilësia e parashikimit kërkon Northern, ndërtimi i bibliotekës cDNA kërkon integritet të lartë dhe RT-PCR dhe RPA (analizimi i mbrojtjes nga Ribonukleaza) nuk kërkojnë integritet të lartë.RT-PCR kërkon pastërti të lartë (mbetje të frenuesit enzimë).
4: Homogjenizimi i plotë është çelësi për përmirësimin e rendimentit dhe reduktimin e degradimit.
5: Kontrolloni integritetin e zbulimit të elektroforezës së ARN-së, 28S: 18S = 2: 1 është një shenjë e plotë, 1: 1 është gjithashtu e pranueshme për shumicën e eksperimenteve.
6: Heqja e ADN-së për RT-PCR, analiza e grupit Është mirë të përdoret Dnase I për të hequr ADN-në.
7: Zvogëloni ndotjen e enzimave ekzogjene – enzimat nuk mund të importohen nga jashtë.
8: Kur përqendrohet acidi nukleik me përqendrim të ulët, duhet të shtohet një reagent i bashkëprecipitimit.Por për të parandaluar kontaminimin e enzimave dhe ADN-së që përmban bashkëprecipituesin.
9: Shpërndani tërësisht ARN-në, nëse është e nevojshme, ngroheni në 65C për 5 minuta.
mënyra e përshtatshme e ruajtjes
Mund të ruhet në -20C për një kohë të shkurtër dhe në -80C për një kohë të gjatë.Hapi i parë në përmirësimin e rendimenteve të ARN-së është të kuptojmë se përmbajtja e ARN-së në mostra të ndryshme ndryshon shumë.Bollëk i lartë (2-4 ug/mg) si mëlçia, pankreasi, zemra, bollëk mesatar (0.05-2 ug/mg) si truri, embrioni, veshkat, mushkëritë, timusi, vezoret, bollëku i ulët (<0.05 ug/mg) mg) si fshikëza, kockat, yndyra.
1: Lizoni qelizat për të lëshuar RN - nëse ARN nuk lëshohet, rendimenti do të reduktohet.Homogjenizimi elektrik funksionon më mirë se metodat e tjera të homogjenizimit, por mund të jetë e nevojshme të kombinohet edhe me metoda të tjera, të tilla si pureja e azotit të lëngshëm, tretja enzimatike (Lysozyme/Lyticase)
2: Optimizimi i metodës së nxjerrjes.Problemet më të mëdha me metodat e bazuara në fenol janë shtresimi jo i plotë dhe humbja e pjesshme e ARN-së (supernatanti nuk mund të hiqet plotësisht).Shtresëzimi jo i plotë është për shkak të përmbajtjes së lartë të acidit nukleik dhe proteinave, të cilat mund të zgjidhen duke rritur sasinë e lizatit të përdorur ose duke zvogëluar sasinë e mostrës.Një hap i nxjerrjes së kloroformit iu shtua indit dhjamor.Humbja e ARN-së mund të reduktohet duke pompuar prapa ose duke hequr shtresën organike të ndjekur nga centrifugimi.Problemi më i madh me metodat e bazuara në centrifugim të kolonës është mostra e tepërt.
Këshilla klasike për nxjerrjen
1. Pastrimi i fenolit: Shtoni një vëllim të barabartë 1:1 fenol/kloroform dhe përzieni fuqishëm për 1-2 minuta.Centrifugoni me shpejtësi të lartë për 2 minuta.Hiqni me kujdes supernatantin (80-90%).Asnjëherë mos shkoni në shtresën e mesme.Një vëllim i barabartë i tretësirës së reaksionit mund t'i shtohet Fenolit/Kloroformit dhe sipërnatanti të hiqet.Dy supernatantët mund të përzihen së bashku për precipitimin e acidit nukleik për të përmirësuar rendimentin.Mos jini shumë të butë kur përzieni dhe mos u përpiqni të hiqni të gjithë supernatantin.
2. Larja me etanol 70-80%: Gjatë larjes, acidi nukleik duhet të pezullohet për të siguruar që kripa e mbetur të lahet.Në të njëjtën kohë, menjëherë pas derdhjes së etanolit, centrifugoni me shpejtësi të lartë për disa sekonda dhe më pas hiqni etanolin e mbetur me një pipetë.Treteni pasi të qëndroni në temperaturën e dhomës për 5-10 minuta.
11. Nxjerrja e organizatave të veçanta
1. Indi fibroz: Çelësi i nxjerrjes së ARN-së nga indet fibroze si p.sh. muskujt e zemrës/skeletit është ndërprerja e plotë e indit.Këto inde kanë densitet të ulët qelizor, kështu që sasia e ARN-së për njësi të peshës së indit është e ulët dhe është mirë që të përdoret sa më shumë sasi fillestare.Sigurohuni që të bluani indet tërësisht në kushte ngrirjeje.
2. Indet me përmbajtje të lartë proteinash/yndyrë: përmbajtja e yndyrës së trurit/perimeve është e lartë.Pas nxjerrjes PCI, supernatanti përmban flokula të bardha.Supernatanti duhet të riekstraktohet me kloroform.
3. Indet me përmbajtje të lartë acidi nukleik/ribozimi: shpretka/timusi ka përmbajtje të lartë të acidit nukleik dhe ribozimit.Bluarja e indeve në kushte ngrirjeje e ndjekur nga homogjenizimi i shpejtë mund të çaktivizojë në mënyrë efektive ribozimet.Megjithatë, nëse lizati është shumë viskoz (për shkak të përmbajtjes së lartë të acidit nukleik), ekstraktimi PCI nuk do të jetë në gjendje të shtresohet në mënyrë efektive;shtimi i më shumë lizatit mund ta zgjidhë këtë problem.Ekstraktimet e shumta PCI mund të heqin më shumë ADN të mbetur.Nëse një precipitat i bardhë formohet menjëherë pas shtimit të alkoolit, ai tregon kontaminim të ADN-së.Riekstraktimi me PCI acidike pas tretjes mund të largojë kontaminimin e ADN-së.
4. Indi bimor: Indi bimor është më kompleks se indi i kafshëve.Në përgjithësi, bimët bluhen në kushte të azotit të lëngshëm, kështu që degradimi i ARN-së nga enzimat endogjene është i pazakontë.Nëse problemi i degradimit nuk zgjidhet, pothuajse me siguri shkaktohet nga papastërtitë e përfshira në kampion.Papastërtitë që përmbahen në shumë bimë do të çojnë në mbetje, dhe arsyeja për mbetje është shpesh sepse këto papastërti kanë disa ngjashmëri me ARN-në: ju precipitoni dhe unë precipitoj, dhe ju thithni dhe unë thith.Këto karakteristika përcaktojnë se ato janë frenues shumë të fortë enzimë.
Aktualisht, reagentët komercialë për nxjerrjen e ARN-së mund të përshtaten pothuajse në të gjitha indet e kafshëve me rregullime të vogla, por ka pak reagentë komercialë për nxjerrjen e ARN-së që mund të jenë të përshtatshëm për shumicën e indeve bimore.Për fat të mirë, Foregene mund të ofrojë të veçantakomplete për nxjerrjen e ARN-së së bimëve, ne kemiKompleti i izolimit të ARN-së totale të bimëve, Kompleti i izolimit total të ARN-së së bimëve Plus.Ky i fundit është projektuar posaçërisht për bimët me përmbajtje të lartë polisakaride dhe polifenol.Për nxjerrjen e ARN-së, reagimet nga përdoruesit e laboratorit janë veçanërisht të mira.
12. Efekti i ngrirjes dhe shkrirjes së mostrës Mostra e ngrirë mund të jetë më e madhe dhe duhet të pritet përpara se të përdoret për nxjerrjen e ARN-së.Mostrat priren të shkrihen (ndoshta pjesërisht) gjatë prerjes.Mostrat e ngrira mund të kenë nevojë të peshohen përpara nxjerrjes së ARN-së dhe shkrirja do të ndodhë patjetër gjatë këtij procesi.Ndonjëherë, shkrirja e kampionit ndodh edhe gjatë procesit të bluarjes me azot të lëngët;ose kampioni i ngrirë i shtohet drejtpërdrejt lizatit pa bluarje me azot të lëngshëm dhe shkrirja do të ndodhë patjetër përpara homogjenizimit të plotë.Eksperimentet kanë treguar se indet e ngrira janë më të prirur ndaj degradimit të ARN-së gjatë shkrirjes sesa indet e freskëta.Arsyeja e mundshme: Procesi i ngrirjes-shkrirjes prish strukturat brenda qelizës, duke e bërë më të lehtë që enzimat endogjene të vijnë në kontakt të drejtpërdrejtë me ARN-në.
13. Gjykimi i cilësisë së ARN-së Zakonisht, elektroforeza përdoret për të gjykuar integritetin e ARN-së, dhe A260/A280 përdoret për të gjykuar pastërtinë e ARN-së.Në teori, ARN e paprekur ka një raport 28S:18S = 2.7:1, dhe shumica e të dhënave theksojnë raportin 28S:18S = 2:1.Fakti është se pothuajse asnjë nga ARN-të e nxjerra nga mostrat përveç qelizave nuk është në një raport 2:1 (kjo është marrë duke përdorur Agilent Bioanalyzer).
Rezultatet e elektroforezës së ARN-së ndikohen nga shumë faktorë, duke përfshirë strukturën dytësore, kushtet e elektroforezës, ngarkesën e mostrës, shkallën e ngopjes nga EB, etj. Përdorni elektroforezën vendase për të zbuluar ARN-në dhe përdorni Markerin e ADN-së si kontroll.Nëse 28S në 2kb dhe 18S në 0.9kb janë të qarta, dhe 28S: 18S > 1, integriteti mund të plotësojë kërkesat e shumicës së eksperimenteve të mëvonshme.
A260/A280 është një tregues që ka shkaktuar shumë konfuzion.Para së gjithash, është e nevojshme të sqarohet kuptimi origjinal i këtij treguesi për acidet nukleike: ARN e pastër, A260/280 e saj = rreth 2.0.ARN e pastër është 'shkaku' dhe A260/A280 = 2 është 'efekti'.Tani të gjithë po përdorin A260/A280 si 'shkak', duke menduar se "nëse A260/A280 = 2, atëherë ARN është e pastër", gjë që natyrisht çon në konfuzion.
Nëse jeni të interesuar, mund të shtoni pak reagent që përdoret shpesh në nxjerrje, si p.sh. fenol, izotiocianat guanidine, PEG, etj., në kampionin tuaj të ARN-së dhe më pas të matni raportin A260/A280.Realiteti është se shumë nga reagentët e përdorur për nxjerrjen e ARN-së, si dhe shumë papastërti në kampion, thithin rreth A260 dhe A280, duke ndikuar në A260/A280.
Qasja më udhëzuese për momentin është skanimi i mostrave të ARN-së në intervalin 200-300 nm.Kurba e ARN-së së pastër ka këto karakteristika: kurba është e lëmuar, A230 dhe A260 janë dy pika përkuljeje, A300 është afër 0, A260/A280 = rreth 2,0 dhe A260/A230 = rreth 2,0.Nëse të dhënat e skanimit nuk janë të disponueshme, duhet të përcaktohet edhe raporti A260/A230, pasi ky raport është më i ndjeshëm ndaj bartjes së të gjitha papastërtive që ndikojnë në reaksionin enzimatik.Merrni parasysh gamën lineare të pajisjes (0,1–0,5 për A260).
Ka dy dukuri të tjera të dobishme: raporti do të jetë rreth 0,3 më i ulët kur matet në ujë A260/A280;ndërsa raporti i matur në 10 mM EDTA është rreth 0,2 më i lartë se ai i matur në 1 mM EDTA.
Produkte të ngjashme:
Prodhuesi dhe Furnizuesi i Kompleteve të Izolimit të ARN-së totale të Kinës |Foregene (foreivd.com)
Seritë e izolimit të ARN - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Koha e postimit: 15 korrik 2022
