Raporti i ulët i A260/A230 zakonisht shkaktohet nga papastërtitë me gjatësi vale maksimale të absorbimit në 230 nm.Le të shohim se çfarë përfshijnë këto papastërti:

• Ndotësit e zakonshëm	Gjatësia e valës së përthithjes	Efekti i raportit
  Proteina	~ 230 nm dhe 280 nm	Reduktimi i njëkohshëm i A260/A 280dhe A260/A 280raportet
  Kripë guanidine	220-240 nm	Zvogëloni A260/A 280raport
  Fenolit	~ 270 nm	-
  Trizol	~ 230 nm dhe 270 nm	Zvogëloni A260/A 280raport
  EDTA	~ 230 nm	Zvogëloni A260/A 280raport
  Etanol	230-240 nm	Zvogëloni A260/A 280raport

 
 
 
Gjatësia e valës së përthithjes dhe vlera e kontrastit të ndotësve të zakonshëm

Pkontaminimi i rotinës
Ndotja e proteinave mund të konsiderohet si ndotja më e zakonshme në procesin e nxjerrjes së acidit nukleik.Proteina ekziston midis fazës së sipërme ujore dhe asaj të poshtmeorganikefaza .Ndotja do të zvogëlojë raportin e A260/A280 dhe A260/A230 në të njëjtën kohë, dhe raporti i A260/A230 do të ndryshojë më qartë se raporti i A260/A280.
Gjatë të mëvonshmetranskriptimi i kundërtor Reaksionet qPCR, Mbetjet e proteinave mund të pengojnë ose ndërhyjnë në funksionin e enzimës.Mënyra më e mirë për të shmangur kontaminimin e proteinave është të mbani parasysh parimin e "më pak se më shumë, një sasi e vogël shumë herë" kur aspironi supernatantin.

2. Ndotja nga Guanidinium
hidrokloruri (GuHCl) dhe tiocianati i guanidinës (GTC) kanë efektin e denatyrimit të proteinave, të cilat mund të shkatërrojnë shpejt membranat qelizore gjatë procesit të nxjerrjes së acidit nukleik, duke shkaktuar denatyrim dhe reshje të proteinave.Gjatësia e valës së përthithjes së GuHCl dhe GTC është midis 220-240 nm, dhekripa e mbetur e guanidiniumit do të zvogëlojë raportin e A260/A230.Megjithëse kripa e mbetur e guanidiniumit do të zvogëlojë raportin,ndikimi në eksperimentet e poshtme është në fakt i papërfillshëm.

3. Ndotja me Trizol
Komponenti kryesor i Trizolit është fenoli.Funksioni kryesor i fenolit është lizimi i qelizave dhe lirimi i proteinave dhe substancave të acidit nukleik në qeliza.Megjithëse fenoli mund të denatyrojë në mënyrë efektive proteinat, ai nuk mund të frenojë plotësisht aktivitetin e RNase.Prandaj, 8-hidroksikinolina, izotiocianati i guanidinës, β-merkaptoetanoli, etj. i shtohen TRIzol për të frenuar RNazën endogjene dhe ekzogjene.
Kur nxjerr ARN qelizore, Trizol mund të lizojë me shpejtësi qelizat dhe të frenojë nukleazën e çliruar nga qelizat, dhe Trizoli i mbetur do të zvogëlojë ndjeshëm raportin e A260/A230.
Mënyra e përpunimit: Gjatë centrifugimit duhet theksuar se fenoli në Trizol tretet lehtësisht në fazën e ujit në kushte 4° dhe temperaturë dhome.

4. Mbetjet e etanolit
Etanoli përdoret në procesin përfundimtar për të precipituar ADN-në ndërsa shpërndajnë jonet e kripës që mund të lidhen me ADN-në.Gjatësia e valës së absorbimit është më e lartaPika e përthithjes sëetanoli është gjithashtu në 230-240 nm, i cilido të zvogëlojë gjithashtu raportin e A260/A230.
Metoda e shmangies së mbetjeve të etanolit mund të përsëritet dy herë gjatë elucionit përfundimtar, duke fryrë nëkapuç tymipër dy minuta për të lejuar që etanoli të avullojë plotësisht përpara se të shtoni tampon për elucionin.
Megjithatë, duhet ditur se raporti është vetëm një indeks vlerësimi i cilësisë së ARN-së.Nëse operacionet e sipërpërmendura janë të rregulluara rreptësisht, devijimi midis raportit dhe diapazonit standard nuk do të ketë një ndikim të madh në eksperimentet në rrjedhën e poshtme.
Produkte të ngjashme:
Kompleti i izolimit të ARN-së totale të kafshëve
Kompleti i izolimit të ARN-së totale të bimëve
Kompleti i izolimit të ARN-së totale të qelizave
Kompleti i izolimit total të ARN-së së bimëve Plus