Ne kemi qenë prodhues me përvojë.Fitimi i shumicës në çertifikatat thelbësore të tregut të saj për Zbritje të mëdha në Kinë me Ndjeshmëri të Lartë me Një hap Rt-QpcrKompleti V2, Cilësia është jeta e fabrikës, Fokusimi në kërkesën e klientit është burimi i mbijetesës dhe zhvillimit të kompanisë, Ne i përmbahemi ndershmërisë dhe qëndrimit të punës me mirëbesim, duke pritur me padurim ardhjen tuaj!
Ne kemi qenë prodhues me përvojë.Fitimi i shumicës në certifikatat vendimtare të tregut të saj përChina Taq ADN Polimeraza, Qpcr, Kompania jonë premton: çmime të arsyeshme, kohë të shkurtër prodhimi dhe shërbim të kënaqshëm pas shitjes, ne gjithashtu ju mirëpresim të vizitoni fabrikën tonë në çdo kohë që dëshironi.Uroj që tani të kemi një biznes të këndshëm dhe afatgjatë së bashku!!!

Përshkrimet

Ky komplet përdor një sistem unik tampon lize që mund të çlirojë shpejt ARN nga mostrat e qelizave të kultivuara për reaksionet RT-qPCR, duke eliminuar kështu procesin e pastrimit të ARN-së që kërkon kohë dhe të mundimshme.Modeli i ARN-së mund të merret në vetëm 7 minuta.Reagentët 5×Direct RT Mix dhe 2×Direct qPCR Mix-SYBR të ofruara nga kompleti mund të marrin shpejt dhe në mënyrë efektive rezultate sasiore PCR në kohë reale.

5×Direct RT Mix dhe 2×Direct qPCR Mix-SYBR kanë tolerancë të fortë ndaj frenuesit dhe lizati i mostrave mund të përdoret si shabllon për RT-qPCR drejtpërdrejt.Ky komplet përmban transkriptazën e kundërt Foregene me afinitet të lartë të ARN-së dhe polimerazën e ADN-së Hot D-Taq, dNTPs, MgCl₂, tampon reaksioni, optimizues PCR dhe stabilizues.

Specifikimet

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Komponentët e kompletit

Karakteristikat dhe avantazhet

■ E thjeshtë dhe efektive: me teknologjinë Cell Direct RT, mostrat e ARN-së mund të merren në vetëm 7 minuta.

■ Kërkesa e mostrës është e vogël, deri në 10 qeliza mund të testohen.

■ Rezultat i lartë: mund të zbulojë shpejt ARN në qelizat e kultivuara në pllaka 384, 96, 24, 12, 6 pusesh.

■ Goma e ADN-së mund të heqë shpejt gjenomet e lëshuara, duke reduktuar shumë ndikimin në rezultatet e mëvonshme eksperimentale.

■ Sistemi i optimizuar RT dhe qPCR e bën transkriptimin e kundërt RT-PCR me dy hapa më efikas dhe PCR më specifik dhe më rezistent ndaj frenuesve të reaksionit RT-qPCR.

Aplikimi i kompletit

Fusha e aplikimit: qeliza të kultivuara.

- ARN e çliruar nga liza e mostrës: e zbatueshme vetëm për shabllonin RT-qPCR të këtij kompleti.

- Kompleti mund të përdoret për qëllimet e mëposhtme: analiza e shprehjes së gjeneve, verifikimi i efektit të heshtjes së gjeneve të ndërmjetësuara nga siRNA, shqyrtimi i barnave, etj.

Diagramë

Ruajtja dhe afati i ruajtjes

Pjesa I e këtij kompleti duhet të ruhet në 4℃;Pjesa II duhet të ruhet në -20℃.

Foregene Protease Plus II duhet të ruhet në 4℃, mos ngrini në -20℃.

Reagenti 2×Direct qPCR Mix-SYBR duhet të ruhet në -20℃ në errësirë;nëse përdoret shpesh, mund të ruhet edhe në 4℃ për ruajtje afatshkurtër (përdoret brenda 10 ditëve). Ne kemi qenë prodhues me përvojë.Duke fituar shumicën në çertifikatat vendimtare të tregut të saj për Kina me ulje të madhe me Ndjeshmëri të Lartë Kit Rt-Qpcr me një hap V2, Cilësia është jeta e fabrikës, Fokusimi në kërkesën e klientit është burimi i mbijetesës dhe zhvillimit të kompanisë, Ne i përmbahemi ndershmërisë dhe qëndrimit të punës me mirëbesim, duke pritur ardhjen tuaj!
Zbritje e madheChina Taq ADN Polimeraza, Qpcr, Kompania jonë premton: çmime të arsyeshme, kohë të shkurtër prodhimi dhe shërbim të kënaqshëm pas shitjes, gjithashtu ju mirëpresim të vizitoni fabrikën tonë në çdo kohë që dëshironi.Uroj që tani të kemi një biznes të këndshëm dhe afatgjatë së bashku!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Takman

Kat.Nr.DRT-01021/01022

Për qelizat direkte RT-qPCR duke përdorur ≤ 1000,000 qeliza

Prezantimi i produktit

Ky produkt përdor një sistem unik tampon lize për të çliruar shpejt ARN nga mostrat e qelizave të kultivuara për reaksionet RT-qPCR, duke eliminuar procesin e pastrimit të ARN-së që kërkon kohë dhe të mundimshme, dhe vetëm 7 minuta për të marrë shabllonin e kërkuar të ARN-së, me 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman rezultate të shpejta dhe efikase të siguruara nga kit-Taqman në kohë reale.

5× Direct RT Mix dhe 2× Direct qPCR Mix-Taqman kanë tolerancë të fortë ndaj frenuesit dhe mund të kryejnë kthim efikas dhe përforcim specifik duke përdorur lizën e kampionit që do të matet si shabllon.Reagenti përmban Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq ADN Polimerase, dNTPs, MgCl₂, Reaction Buffer, PCR Optimizer dhe Stabilizer, i cili mund të përdoret me tampon lysis për të zbuluar shpejt dhe me lehtësi mostrat, dhe ka karakteristikat e ndjeshmërisë, specifikës dhe stabilitetit të lartë.

Karakteristikat e produktit

Teknologji e thjeshtë dhe efektive Cell Direct RT që kërkon vetëm 7 minuta për të marrë mostrat e ARN-së.

Kërkesat për mostra janë të vogla dhe të paktën 10 qeliza të kultivuara mund të përdoren për eksperimentim.

Rezultat i lartë për marrjen e shpejtë të ARN-së të qelizave të kultivuara si pjatat 384, 96, 24, 12 dhe 6 pusesh.

ADN Eraser është në gjendje të heqë shpejt gjenomet e lëshuara, duke reduktuar në masë të madhe ndikimin në rezultatet e mëvonshme eksperimentale.

Sistemet e optimizuara RT dhe qPCR mundësojnë RT-PCR me dy hapa me transkriptim të kundërt më efikas, specifikë dhe tolerancë më të fortë ndaj frenuesit të reagimit RT-qPCR.

Aplikimi i kompletit

Fusha e aplikimit: Qeliza të kultivuara.

ARN e interpretuar nga liza e kampionit: përdoret vetëm si shabllon RT-qPCR me dy hapa.

Kompletet mund të përdoren për qëllimet e mëposhtme: analiza e shprehjes rregullatore të gjeneve, testimi i aleleve, shqyrtimi i barnave, etj.

Kufizimet e kompletit

Fragmente të përforcuara ≤ 300 bp.

Kompletet përdoren për kultivimin e qelizave të freskëta.

Kontrolli i cilësisë së produktit

Sipas Sistemit të Menaxhimit të Cilësisë Totale të FOREGENE, çdo grup i kompleteve të serisë Cell Direct RT-qPCR testohet në mënyrë rigoroze disa herë për të siguruar besueshmërinë dhe stabilitetin e cilësisë së çdo grupi kompletesh.

Përmbajtja e kompletit

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman mund të blihen veçmas, detajet jepen në Shtojcën 1 (FAQJA 13).

Kushtet e ruajtjes

1. Kushtet e transportit

I gjithë procesi i transportit të kutisë së paketimit të akullit me temperaturë të ulët, për të siguruar që kompleti të jetë në gjendje <4 °C.

2. Kushtet e ruajtjes

Ruani pjesën I në 4°C dhe Pjesa II në -20°C.

Foregene Protease Plus II duhet të ruhet në 4°C, jo të ngrirë në -20°C.

Reagenti 2× Direct qPCR Mix-Taqman ruhet në -20°C, ose në 4°C për përdorim afatshkurtër nëse përdoret shpesh (brenda 10 ditëve).

Informacioni i komponentit të kompletit

Buffer CL: Siguron mjedisin e kërkuar për reaksionet e lizës së qelizave.

Buffer ST: Përfundon substancën aktive në lizat për të shmangur efektet në RT pasuese.

ADN Eraser: heqës i ADN-së, efekti i heqjes së gjenomit në eksperimentet e mëvonshme.

5× Përzierje e drejtpërdrejtë RT: Përmban transkriptazën e kundërt Foregene me afinitet të lartë të ARN-së, frenuesin e RNase, dNTPs, stabilizues, përmirësues, optimizues dhe primerë të transkriptimit të kundërt për shtrirje optimale (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Abetare).

Foregene Protease Plus II: Në kontekstin e tamponit të lizës, qelizat lizohen për të lëshuar acide nukleike.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Ky reagent përmban Hot D-Taq ADN Polimerazë, dNTPs, MgCl₂, tampon reaksioni, optimizues PCR dhe stabilizues.

Bojë referimi 20× ROX: Përdoret përgjithësisht në instrumentet e amplifikimit PCR në kohë reale të ABI, Stratagene dhe kompanive të tjera, përdoret për të rregulluar ndryshimin midis tubave PCR dhe tubave të shkaktuar nga gabimet e dozimit PCR.Përqendrimi i ngjyrës referencë 20× ROX që kërkohet për instrumente të ndryshme është i ndryshëm dhe përdoruesi mund ta shtojë atë sipas përqendrimit të rekomanduar të instrumentit.

DdH pa RNase₂O: Ujë ultra i pastër i sterilizuar pa RNase për reaksione RT-qPCR me dy hapa.

Masa paraprake:(Sigurohuni të lexoni me kujdes masat paraprake përpara se të përdorni kompletin)

Kushtojini vëmendje metodës së funksionimit të eksperimentit për të shmangur kontaminimin e kryqëzuar midis mostrave.

Kushtojini vëmendje pastërtisë së mjedisit eksperimental dhe enëve për të shmangur ndotjen me RNase dhe degradimin e ARN-së.

Merrni mostra qelizash të freskëta ose të ruajtura mirë dhe mos përdorni kurrë mostra të përsëritura të qelizave të ngrira-shkrirë.

5× Direct qPCR Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman duhet të shmangë ngrirje-shkrirjen e përsëritur, përndryshe do të ndikojë në transkriptimin e kundërt dhe efikasitetin e PCR.

Preparacionetpërparaoperacion

Sigurohuni që të lexoni me kujdes udhëzimet përpara se të përdorni këtë komplet.Kompleti Cell Direct RT-qPCR është i thjeshtë, i përshtatshëm dhe i shpejtë për t'u përdorur, dhe udhëzimet ofrojnë informacion të plotë për të gjithë kompletin dhe mënyrën e përdorimit të duhur.Përgatitni materialet dhe pajisjet e nevojshme eksperimentale përpara përdorimit.

Materialet dhe pajisjet eksperimentale

◆ Qelizat e kulturës.

◆ 1,5 ml ose 2 ml, tub centrifuge pa RNase-/DNase, majë pa RNase-/DNase, tub qPCR steril 0,2 ml.

◆ Makinë qPCR, pipetë, centrifugë tavoline (≥13,400×g) (në varësi të nevojave eksperimentale) etj.

Siguria

◆ Ky produkt është vetëm për qëllime kërkimore shkencore, ju lutemi mos e përdorni për qëllime farmaceutike, klinike, ushqimore dhe kozmetike.

◆ Kur përdorni kimikate, vishni rroba të përshtatshme laboratori, doreza, syze mbrojtëse, etj.

Operacioniudhërrëfyes

Sistemet Cell Lysis, sistemet RT dhe paketat shtesë të solucionit të reagimit qPCR mund të blihen veçmas, për detaje në Shtojcën 1 (FAQJA 13).

Udhëzues operimi

Përgjigje: Lirimi i mostrës së ARN-së

1. Qelizat u trajtuan paraprakisht: Lani pllakën e kulturës së qelizave me PBS të ftohtë, më pas lizoni qelizat (10-10⁶), 10⁶ se sa sasia e qelizave, rekomandohet Foregene the Cell an ARN Isolation Kit The Total (DE-03111) ose Animal Total Isolation Kit (DE-03011) për nxjerrjen dhe pastrimin e ARN-së.

1.1.Qelizat ngjitëse (pllakë 24 pusesh si shembull)

1.1.1.Përcaktoni numrin e qelizave në çdo pus, përcaktoni që numri i qelizave është 1 × 10⁵, dhe përdorni një pipetë për të hequr mjedisin e kulturës nga ena e kulturës.

1.1.2.Shtoni 200 μl 1 × PBS të ftohur paraprakisht në çdo pus.Mos pipet në mënyrë të përsëritur dhe hiqni PBS nga puset.Anoni pjatën dhe hiqni sa më shumë PBS të jetë e mundur.Vazhdoni në hapin 2.

1.1.3.Pjatë e ndryshme e kulturës qelizore ose një tabelë me numra referimi 1-1 në një enë kulture qelizore u shtua e paraftohur 1 × PBS për larjen e qelizave.

Tabela 1-1: Doza e PBS për numra të ndryshëm qelizash

shënim：Për të siguruar një ngjitje të fortë të qelizave,një numër i madh i humbjes së qelizave shmanget gjatë larjes.

1.2.Qelizat e pezullimit ose qelizat ngjitëse të kultivuara në pllaka jo poroze

1.2.1.Qelizat ngjitëse të kultivuara në pllaka jo shumë pusesh (qelizat e pezullimit fillojnë nga hapi tjetër 1.2.2), mbledhin dhe ndajnë qelizat sipas metodës normale të grumbullimit të qelizave dhe vendosen në një pjatë kultivimi ose tub centrifugimi;nëse përdoret tripsinizimi, kërkohet centrifugimi për të mbledhur qelizat dhe për të hequr tripsinën e mbetur, shtohen qelizat e risuspenduara PBS në qeliza individuale për të shpërndarë qelizat.

1.2.2.Pas numrit të qelizave të numëruara, qelizat u ndanë 1×10⁵ një për të centrifuguar tubat, mblidhni qelizat me centrifugim në 1000 × g për 10 min.

1.2.3.Shtoni 200 μl PBS në tubin e centrifugës, mos e pipetoni në mënyrë të përsëritur dhe aspironi drejtpërdrejt PBS.vazhdo në hapin 2. (Nëse është e vështirë të precipitohet dhe qelizat janë risuspenduar përsëri, mund të kryhen 1000×g të centrifuguara 10 minuta pas hedhjes së supernatantit, peleti i qelizës vazhdon në hapin 2)

2.Liza e qelizave: Hiqni buferin CL, temperaturën e tij të ekuilibruar në temperaturën e dhomës, ADN Eraser dhe Foregene Protease Plus II, sipas tabelës së mëposhtme 1-2 të përgatitur sistemin e lizës: (tretësira e lizës është gati për përdorim).

Tabela 1-2: dekolte përgatitja e sistemit (Shënim: në përgatitjen në akull)

3.( Pllakë 24 pusi si shembull) Hidhni me pipetë 200 μl të përzierjes kryesore të lizës së qelizave në çdo pus, fryni në mënyrë të përsëritur 5-10 herë, Inkuboni në temperaturën e dhomës (20-25 ℃) për 5 min.

shënim：Për të shmangur formimin e flluskave, ju lutemi kur shkalla e pipetës me pipetë rregullohej në 200μl ose më pak.Qelizat mund të duken të turbullta pas lizës, gjë që është normale.

4.(Pllakë 24 pusi si shembull) shtohet në lëngun 20 μl Buffer ST (sisteme të ndryshme lize Buferi ST i shtuar në një sasi të treguar në tabelën 1-3), tubimi i përsëritur 5-10 herë, në temperaturën e dhomës (20-25 ℃) u inkubua për 2 min.

shënim：Maja e pipetës është hedhur poshtë sipërfaqes, duke siguruar që lizati është shtuar,për të shmangur formimin e flluskave, ju lutemi kur shkalla e pipetës së pipetës u rregullua në 200μl ose më pak.

Tabela 1-3：Shto buffer ST

5. Lizati përdoret për eksperimentet e mëvonshme RT-qPCR.Nëse eksperimentet e mëvonshme nuk mund të kryhen në kohë, ju lutemi mbajeni në akull jo më shumë se 2 orë dhe ruajeni në -20℃ ose -80℃ (jo më shumë se tre muaj).

B: Përgatitja e sistemit RT

1.Nxirreni 5 × Direct RT Mix dhe vendoseni në një banjë akulli, lëreni të shkrihet në mënyrë natyrale dhe përziejeni butësisht për përdorim të mëvonshëm;hiqni ddH2O pa RNase dhe shkrijeni dhe vendoseni në një banjë akulli për përdorim të mëvonshëm.Përgatitni sistemin e reagimit në akull sipas tabelës 2-1 më poshtë.

Tabela 2-1: Përgatitja e sistemit të reagimit RT

2. Pas përfundimit të formulimit të sistemit, përzihet butësisht dhe centrifugohet shkurtimisht në tabelën e mëposhtme 2 -2 Kushtet e reagimit Reaksioni RT.

Tabela 2-2: Cilësimi i gjendjes së reagimit RT

3.Pas përfundimit të reagimit, produkti i reagimit u vendos direkt në akull për qPCR, ju lutemi vendosni ruajtjen afatgjatë -20℃ ose -80 ℃.

Shënim: Për shkak të përdorimit të shabllonit jo të pastruar, në produktin e transkriptimit të kundërt mund të shfaqen precipitate të bardha.Ky është një fenomen normal.Centrifugoni supernatantin menjëherë për eksperimentet e mëpasshme.

Zgjidhja e reaksionit RT që rezulton i shtohet sistemeve të reaksionit PCR në kohë reale në hapin tjetër, rekomandohet të shtoni sasi që variojnë nga 10-30% të sistemit të reagimit.

C: Përgatitja e sistemit të reagimit qPCR

1. Sasia e duhur e B e përgatitur në shabllonin cDNA të hapit sipas tabelës së mëposhtme 3-1 për të përgatitur një sistem reaksioni.

Shënim: Sasia e modelit cDNA përbën 10-30% të sistemit qPCR.Për shembull, në një sistem qPCR 20 μl, shtoni 2-6 μl bufer lize, por jo më shumë se 6 μl.

2. Kushtet e mira të optimizimit qPCR (Temperatura e pjekjes etj.) për reaksionin qPCR (Kushtet e reagimit të dhëna në Tabelën 3-2).

Shënim: Përpiquni të përdorni kushte të optimizuara për reaksionet qPCR për të marrë rezultate më të mira.

Tabela 3-1: Përgatitja e sistemit të reagimit PCR

1*: Përqendrimi i primerit mund të rregullohet në intervalin 50-900 nM kur performanca e reaksionit të primerit është e dobët.

Shënim: Sistemi qPCR mund të rregullohet sipas nevojave eksperimentale dhe modelit të cikluesit fluoreshent.Për qPCR në 50μl sistem, rregulloni dozën e reagentit proporcionalisht sipas 20μl sistem.

2*: Zgjidhni përqendrimin e duhur përfundimtar të bojës referuese ROX sipas cikluesit sasior termik të fluoreshencës.Përqendrimet më të përshtatshme të bojës referencë ROX për ciklerat sasiore të zakonshme të fluoreshencës janë paraqitur në tabelën më poshtë:

Tabela 3-2: Janë dhënë kushtet e reagimit qPCR

Shënim: Për të marrë efektin më të mirë qPCR, gradient PCR mund të përdoret për të optimizuar kushtet e reagimit për shabllone të ndryshëm dhe primerë të ndryshëm.Kushtet e reagimit PCR ndryshojnë në varësi të analizuesit të fluoreshencës, shabllonit, primerit, etj. Në funksionimin specifik, kushtet optimale të reagimit duhet të dizajnohen sipas kushteve specifike të cikluesit sasior termik të fluoreshencës, llojit të shabllonit, madhësisë së fragmentit me interes, sekuencës bazë të fragmentit të përforcuar dhe përmbajtjes GC dhe gjatësisë së temperaturës së reaksionit, etj.

Parimet e projektimit të primerit PCR në kohë reale

Forward Primer dhe Reverse Primer

Për PCR në kohë reale, dizajni i primerit është shumë i rëndësishëm.Primerët lidhen me specifikën dhe efikasitetin e amplifikimit PCR dhe mund të dizajnohen duke iu referuar parimeve të mëposhtme:

◆ Gjatësia e primerit: 18-30 bp.

◆ Përmbajtja GC: 40-60%.

◆ Vlera Tm: Softueri i projektimit të Primer, si Primer 5, mund të japë vlerën Tm të primerit.Vlerat e Tm të primerëve në rrjedhën e sipërme dhe të poshtme duhet të jenë sa më afër që të jetë e mundur.Formula e llogaritjes së Tm mund të përdoret gjithashtu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Gjatë kryerjes së PCR, një temperaturë nën vlerën Tm të primerit prej 5 °C zgjidhet përgjithësisht si temperatura e pjekjes (rritja përkatëse në temperaturën e pjekjes mund të rrisë specifikën e reaksionit PCR).

◆ Primerë dhe produkte PCR:

◆ Gjatësia e produktit për amplifikimin e PCR të primerit të projektimit preferohet të jetë 100-150 bp.

◆ Abetaret e projektimit në zonën strukturore dytësore të shabllonit duhet të shmangen sa më shumë që të jetë e mundur.

◆ Shmangni formimin e 2 ose më shumë bazave plotësuese midis skajeve 3' të primerëve në rrjedhën e sipërme dhe të poshtme.

◆ Baza e terminalit të primerit 3' nuk mund të jetë e pranishme me 3 G ose C shtesë të njëpasnjëshme.

◆ Vetë primerët nuk mund të kenë struktura plotësuese, përndryshe do të krijohet një strukturë flokësh, e cila ndikon në amplifikimin e PCR.

◆ ATCG duhet të shpërndahet sa më në mënyrë të barabartë në sekuencën e primerit dhe baza e terminalit 3′ duhet të shmanget si T.

Shtojca1：Cell DirectRT-qPCR Komponenti i kompletitt paketë shtesë

1.Tretësira e lizës së qelizave