Udhëzues për analizën e problemeve

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Asnjë ARN nuk mund të nxirret ose rendimenti i acidit nukleik është i ulët

Zakonisht ka shumë faktorë që ndikojnë në efikasitetin e rikuperimit, të tilla si: përmbajtja e ARN-së së mostrës, mënyra e funksionimit, vëllimi i elucionit, etj.

Analiza e shkaqeve të zakonshme:

1. Banjë akulli ose centrifugim në temperaturë të ulët (4 ° C) gjatë funksionimit.

Sugjerim: Funksionimi në temperaturën e dhomës (15-25 ° C), asnjëherë banjë akulli dhe centrifugim me temperaturë të ulët.

2. Ruajtja e papërshtatshme e mostrës ose ruajtja e mostrës për një kohë të gjatë.

Sugjerim: Ruani mostrat në -80 ° C ose ngrini në azot të lëngshëm dhe shmangni përdorimin e përsëritur të ngrirjes-shkrirjes;përpiquni të përdorni mostrat e sapo mbledhura për nxjerrjen e ARN-së.

3.Liza e pamjaftueshme e kampionit

Rekomandim: Ju lutemi sigurohuni që kampioni dhe solucioni i punës (Akrilamid linear) të jenë përzier plotësisht dhe të inkubohen për 10 minuta në temperaturën e dhomës (15-25 ° C)

4.Eluenti është shtuar gabimisht

Rekomandim: Sigurohuni që ddH2O pa RNase të shtohet në mes të membranës së kolonës së pastrimit

5.Vëllimi i papërshtatshëm i etanolit anhydrous në Buffer viRW2

Sugjerim: Ju lutemi ndiqni udhëzimet, shtoni vëllimin e duhur të etanolit anhidrik në Buffer viRW2 dhe përziejini mirë përpara se të përdorni kompletin.

6. Përdorimi jo i duhur i mostrës.

Sugjerim: 200µl kampion për 500µl Buffer viRL.Vëllimi i tepërt i mostrës do të rezultojë në uljen e shkallës së nxjerrjes së ARN-së.

7.Vëllimi jo i duhur i elucionit ose elucioni jo i plotë.

Sugjerim: Vëllimi i eluentit të kolonës së pastrimit është 30-50μl;nëse efekti i elucionit nuk është i kënaqshëm, rekomandohet të shtoni ddH pa RNase të ngrohur paraprakisht₂O dhe zgjasni kohën e vendosjes në temperaturën e dhomës, si p.sh. 5-10 min

8. Kolona e pastrimit ka mbetje etanoli pas shpëlarjes në Buffer viRW2.

Sugjerim: Nëse etanoli mbetet ende pas shpëlarjes në Buffer viRW2 dhe centrifugimit me tub bosh për 2 minuta, kolona e pastrimit mund të lihet në temperaturën e dhomës për 5 minuta pas centrifugimit në tub bosh për të hequr plotësisht etanolin e mbetur.

Degradimi i molekulave të ARN-së të pastruar

Cilësia e ARN-së së pastruar lidhet me faktorë të tillë si ruajtja e mostrës, ndotja me RNase dhe funksionimi.

Analiza e shkaqeve të zakonshme:

1. Mostrat e mbledhura nuk u ruajtën në kohë.

Sugjerim: Nëse mostra nuk përdoret në kohë pas grumbullimit, ju lutemi ruani menjëherë në -80 ℃ ose azot të lëngshëm.Për nxjerrjen e molekulave të ARN-së, përpiquni të përdorni mostrat e sapombledhura sa herë që është e mundur.

2. Mostrat e mbledhura ngriheshin dhe shkriheshin në mënyrë të përsëritur.

Sugjerim: Shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e përsëritur (jo më shumë se një herë) gjatë mbledhjes dhe ruajtjes së mostrës, përndryshe rendimenti i acidit nukleik do të ulet.

3.RNase është futur në sallën e operacionit ose nuk janë mbajtur doreza, maska, etj.

Sugjerim: Eksperimenti i nxjerrjes së molekulave të ARN-së kryhet më së miri në një dhomë të veçantë operacioni të ARN-së dhe tabela eksperimentale pastrohet para eksperimentit.Vishni doreza dhe maska ​​të disponueshme gjatë eksperimentit për të shmangur degradimin e ARN-së të shkaktuar nga futja e RNase.

4. Reagenti kontaminohet nga RNase gjatë përdorimit.

Sugjerim: Zëvendësoni me komplet të ri të izolimit të ARN-së virale për eksperimentet përkatëse.

5. Ndotja me RNase e tubave të centrifugës, majave të pipetave, etj. Sugjerim: Sigurohuni që tubat e centrifugës, majat e pipetave dhe pipetat të jenë të gjitha pa RNase.

Molekulat e pastruara të ARN-së ndikuan në eksperimentet në rrjedhën e poshtme

Molekulat e ARN-së të pastruara nga kolona e pastrimit do të ndikojnë në eksperimentet e rrjedhës së poshtme nëse ka shumë jone kripe ose proteina, të tilla si: transkriptimi i kundërt, Northern Blot, etj.

1. Ka jone kripe të mbetura në molekulat e elutura të ARN-së.

Rekomandim: Sigurohuni që vëllimi i duhur i etanolit anhidrik të jetë shtuar në Buffer viRW2 dhe lani kolonën e pastrimit dy herë sipas shpejtësisë së saktë të centrifugimit në udhëzimet e përdorimit. Nëse ka ende jone kripe të mbetura, mund të shtoni Buffer viRW2 në kolonën e pastrimit dhe ta lini në temperaturën e dhomës për 5 minuta.Më pas kryeni centrifugimin për të hequr në masën më të madhe kontaminimin e joneve të kripës

2. Ka etanol të mbetur në molekulat e ARN-së së elutur

Sugjerim: pasi të konfirmoni që kolonat e pastrimit janë shpëlarë nga Buffer viRW2, kryeni centrifugimin me tub bosh sipas shpejtësisë centrifugale në udhëzimet e përdorimit.Nëse ka mbetur ende etanol, ai mund të lihet për 5 minuta në temperaturën e dhomës pas një centrifugimi me tub bosh për të hequr etanolin e mbetur në masën më të madhe.

Manualet e udhëzimeve:

Manuali i Udhëzimeve të Kompletit të Izolimit të ARN-së virale