Kompleti i izolimit të ADN-së të shtupës bukale/Kit për izolimin e kartës së FTA-së Kompleti gjenomik i nxjerrjes ose pastrimit të ADN-së nga shtupa bukale
Përshkrimi i kompletit:
Pastroni shpejt ADN-në gjenomike me cilësi të lartë nga mostrat e shtupës bukale/kartës FTA.
◮Nuk ka ndotje me RNase:Kolona vetëm për ADN-në e ofruar nga kompleti bën të mundur heqjen e ARN-së nga ADN-ja gjenomike pa shtuar RNase gjatë eksperimentit, duke parandaluar që laboratori të kontaminohet nga RNaza ekzogjene.
◮Shpejtësi e shpejtë:Proteaza Foregene ka aktivitet më të lartë se proteazat e ngjashme, dhe i tret shpejt mostrat e indeve;Operacioni është i thjeshtë dhe operacioni i nxjerrjes së ADN-së gjenomike mund të përfundojë brenda 20-80 minutave.
◮I përshtatshëm:Centrifugimi kryhet në temperaturën e dhomës dhe nuk ka nevojë për centrifugim në temperaturë të ulët 4°C ose precipitim me etanol të ADN-së.
◮Siguria:Nuk kërkohet ekstraktimi i reagentit organik.
◮Cilesi e larte:ADN-ja gjenomike e nxjerrë ka fragmente të mëdha, pa ARN, pa RNazë dhe përmbajtje jashtëzakonisht të ulët të joneve, të cilat mund të plotësojnë kërkesat e eksperimenteve të ndryshme.
◮Sistemi i mikroelucionit:Mund të rrisë përqendrimin e ADN-së gjenomike, e cila është e përshtatshme për zbulimin ose eksperimentin në rrjedhën e poshtme.
Përshkrim
Ky komplet ofron një metodë efikase dhe të shpejtë për të marrë ADN gjenomike me përqendrim të lartë nga tamponët bukalë dhe FTA Card (pikat e gjakut).Duke përdorur kompaninë tonë'Kolona dhe formula unike e rrotullimit të membranës silicë vetëm me ADN, e kombinuar me Foregene Proteazën, ADN gjenomike me përqendrim të lartë dhe me cilësi të lartë mund të nxirret në 80 minuta.Kolona e vogël e pastrimit e projektuar posaçërisht lidh ADN-në gjenomike dhe ADN-ja mund të elurohet me një sasi të vogël (15μl) sistemi i elucionit për të rritur përqendrimin e ADN-së gjenomike të përftuar, i cili është i përshtatshëm për zbulimin ose eksperimentin në rrjedhën e poshtme.Kompleti mund të përpunojë një ose më shumë mostra në të njëjtën kohë dhe procesi i pastrimit nuk kërkon nxjerrjen e substancave organike si fenoli, kloroformi dhe reshjet e izopropanolit ose etanolit që konsumojnë kohë, dhe operacioni është i thjeshtë dhe që kursen kohë.
Specifikimet
50 Përgatitje
Komponentët e kompletit
| Bufer ST1 |
| Bufer ST2 |
| Akrilamid linear |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Proteaza |
| ADN-Vetëm Kolona |
| Udhëzimet |
Karakteristikat dhe avantazhet
-Pa kontaminim me RNase: Kolona vetëm me ADN-në e ofruar nga kompleti bën të mundur heqjen e ARN-së nga ADN-ja gjenomike pa shtuar RNase gjatë eksperimentit, duke shmangur ndotjen e laboratorit nga RNaza ekzogjene.
-Shpejtësia e shpejtë: Foregene Proteaza ka aktivitet më të lartë se proteazat e ngjashme, tret mostrat shpejt;operacion i thjeshtë.
-Përshtatshëm: Centrifugimi kryhet në temperaturën e dhomës dhe nuk ka nevojë për centrifugim në temperaturë të ulët 4°C ose precipitim me etanol të ADN-së.
-Siguria: Nuk kërkohet nxjerrja e reagentit organik.
-Cilësi e lartë: ADN-ja gjenomike e nxjerrë ka fragmente të mëdha, pa ARN, pa RNazë dhe përmbajtje jashtëzakonisht të ulët jonesh, të cilat mund të plotësojnë kërkesat e eksperimenteve të ndryshme.
-Sistemi i mikroelucionit: Mund të rrisë përqendrimin e ADN-së gjenomike, e cila është e përshtatshme për zbulimin ose eksperimentin në rrjedhën e poshtme.
Aplikimi i kompletit
Është i përshtatshëm për pastrimin e ADN-së gjenomike nga mostrat e mëposhtme: strisone bukale, FTA Card (njolla gjaku).
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
-Ky komplet mund të ruhet për 12 muaj në kushte të thata në temperaturën e dhomës (15-25°C);nëse duhet të ruhet për një periudhë më të gjatë kohore, mund të ruhet në 2-8°C.
Shënim: Nëse ruhet në temperaturë të ulët, tretësira është e prirur ndaj reshjeve.Para përdorimit, sigurohuni që ta vendosni tretësirën në komplet në temperaturën e dhomës për një periudhë kohe.Nëse është e nevojshme, ngroheni paraprakisht në një banjë uji 37°C për 10 minuta për të tretur precipitatin dhe përzieni përpara përdorimit.
- Tretësira Foregene Protease ka një formulë unike, e cila është aktive kur ruhet në temperaturën e dhomës për një kohë të gjatë (3 muaj);aktiviteti dhe qëndrueshmëria e tij do të jenë më të mira kur ruhet në 4°C, prandaj rekomandohet ta ruani në 4°C, mos harroni të mos e mbani në -20°C.
Kolona e pastrimit është e bllokuar
Në këtë komplet, në operacionin e nxjerrjes së ADN-së gjenomike, kolona e pastrimit absorbohet drejtpërdrejt në përzierjen e lizës enzimatike të kampionit pa hapin e centrifugimit dhe kolona e pastrimit mund të bllokohet për shkak të enzimimit jo të plotë dhe viskozitetit të lartë të kampionit.
Shkaqet e mëposhtme të mundshme janë si më poshtë:
1. Tretje enzimatike jo e plotë e mostrave të indeve.
Rekomandim: Koha e përpunimit të mostrës së Foregene Proteazës mund të zgjatet në mënyrë të përshtatshme ose mund të merret supernatanti pas centrifugimit në 12,000 rpm (~ 13,400 × g) për 5 minuta.
2. Përdorimi i tepërt i mostrave të indeve ose indeve të mëdha.
Rekomandim: Është mirë të mos kaloni 1 shtupë bukale në mostër;nëse kampioni është shumë i madh, rrisni dozën e Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 në përputhje me rrethanat.
3. Viskoziteti i kampionit është shumë i lartë.
Rekomandim: Mostrat mund të hollohen siç duhet me 10 mM Tris-HCl përpara nxjerrjes së ADN-së gjenomike.
4. Janë thithur fragmente të kartës së gjakut.
Rekomandim: Koha e centrifugimit kalimtar të hapit 6 të nxjerrjes gjenomike të njollave të gjakut (FTA Card) mund të zgjatet në mënyrë të përshtatshme.
Rendiment i ulët ose pa ADN
Shpesh ka një sërë faktorësh që ndikojnë në rendimentin e ADN-së gjenomike, duke përfshirë origjinën e mostrës, kushtet e ruajtjes së mostrës, përgatitjen e mostrës, manipulimin, etj.
ADN gjenomike nuk mund të merret gjatë ekstraktimit
Shkaqet e mundshme janë si më poshtë:
1. Ruajtja jo e duhur e mostrave ose ruajtja për një kohë të gjatë çon në degradimin e ADN-së gjenomike.
Rekomandim: Tamponët oral preferohet të merren kampione të freskëta dhe nuk këshillohet përdorimi i tamponëve të konservuar për operacionet e nxjerrjes së ADN-së gjenomike;mostrat e njollave të gjakut duhet të sigurojnë që cilësia është e kualifikuar dhe koha e ruajtjes nuk duhet të jetë shumë e gjatë.
2. Përdorimi shumë i vogël i indeve mund të rezultojë në mos nxjerrjen e ADN-së gjenomike përkatëse.
Rekomandim: Ndiqni udhëzimet për marrjen e mostrave të shtupës bukale në udhëzuesin e operimit dhe fshijini sa më shumë që të jetë e mundur në mënyrë që qelizat e mjaftueshme të mund të ngjiten në tampon orale për nxjerrjen e ADN-së gjenomike;për nxjerrjen e mostrës së njollave të gjakut, zona e prerjes së njollave të gjakut mund të rritet siç duhet.
3. Proteaza Foregene ruhet në mënyrë të papërshtatshme, duke rezultuar në uljen e aktivitetit ose inaktivizimin e saj.
Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes së Proteazës Foregene ose zëvendësoni atë me një Proteazë të re Foregene për reaksion enzimatik.
4. Ruajtja e gabuar e kompletit ose koha e ruajtjes është shumë e gjatë, duke rezultuar në dështimin e disa komponentëve në komplet.
Rekomandim: Bleni një komplet të ri për izolimin e ADN-së me shtupë bukale për procedurat përkatëse.
5. Buffer WB nuk shton etanol absolut.
Rekomandim: Konfirmoni që buferi WB shton volumin e saktë të etanolit absolut.
6. Eluenti nuk është shtuar saktë në filmin e silikonit.
Rekomandim: Shtoni pika eluenti të ngrohur më parë 65 °C në mes të membranës silikoni dhe lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.
Izoluar ADN gjenomike me rendiment të ulët
Shkaqet e mëposhtme të mundshme janë si më poshtë:
1. Ruajtja jo e duhur e mostrave ose ruajtja për një kohë të gjatë çon në degradimin e ADN-së gjenomike.
Rekomandim: Tamponat orale preferohet të merren kampione të freskëta dhe tamponët e konservuar nuk duhet të përdoren për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.
2. Nëse sasia e mostrës së indeve është shumë e vogël, përmbajtja e ADN-së gjenomike e nxjerrë do të jetë më e vogël.
Rekomandim: Ndiqni udhëzimet e marrjes së mostrave nga goja në udhëzuesin e përdorimit, duke fshirë sa më shumë që të jetë e mundur në mënyrë që qelizat e mjaftueshme të mund të ngjiten në tampon orale për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.
3. Proteaza Foregene ruhet në mënyrë të papërshtatshme, duke rezultuar në uljen e aktivitetit ose inaktivizimin e saj.
Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes së Proteazës Foregene ose zëvendësoni atë me një Proteazë të re Foregene për reaksion enzimatik.
4. Problemet e eluentit.
Rekomandim: Përdorni Buffer EB për elucionin;nëse përdorni ddH2O ose eluentët e tjerë, konfirmoni që pH e eluatit është midis 7.0-8.5.
5. Eluati nuk shtohet saktë me pika.
Rekomandim: Shtoni pika eluenti në mes të membranës silikoni dhe lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.
6. Lëngu i elucionit akumulohet shumë pak.
Rekomandim: Përdorni eluent për elucionin e ADN-së gjenomike siç kërkohet në udhëzime, të paktën jo më pak se 15 μl.
Pastërti e ulët e ADN-së gjenomike e izoluar
Pastërtia e ulët gjenomike e ADN-së mund të çojë në dështim ose rezultate të pakënaqshme të eksperimenteve në rrjedhën e poshtme, si p.sh.: enzimat nuk mund të hapen, PCR nuk mund të marrë fragmentin e gjenit me interes, etj.
Shkaqet e mundshme janë si më poshtë:
1. Ndotja heteroproteinike, ndotja me ARN.
Analiza: Kolona e pastrimit nuk është larë duke përdorur Buffer PW;kolona e pastrimit të larjes Buffer PW nuk është larë duke përdorur shpejtësinë e duhur centrifugale.
Rekomandim: Sigurohuni që të mos ketë reshje në supernatant përpara se të shtoni etanol;sigurohuni që të lani kolonën e pastrimit sipas udhëzimeve dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.
2. Ndotja e joneve papastërti.
Analiza: Kolona e pastrimit të larjes së buferit WB u hoq ose u la vetëm një herë, duke rezultuar në kontaminim jonik të mbetur.
Rekomandim: Sigurohuni që të lani Buffer WB 2 herë sipas udhëzimeve për të hequr sa më shumë që të jetë e mundur jonet e mbetura.
3. Kontaminimi me enzimë ARN.
Analiza: RNase të huaja u shtuan në tampon;Operacioni i larjes së buferit PW ishte i pasaktë, duke rezultuar në mbetje RNase, duke ndikuar në operacionet eksperimentale të ARN-së në rrjedhën e poshtme, si transkriptimi in vitro.
Rekomandim: Kompletet e izolimit të acideve nukleike të serisë Foregene mund të heqin ARN-në pa shtim shtesë të RNase, kështu që Kompleti i izolimit të ADN-së me shtupë bucal/FTA Card nuk ka nevojë të shtojë RNase;sigurohuni që të ndiqni udhëzimet për kolonën e pastrimit të larjes Buffer PW dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.
4. Mbetjet e etanolit.
Analiza: Buffer WB nuk kreu centrifugim me tub bosh pas larjes së kolonës së pastrimit.
Rekomandim: Kryeni funksionimin e saktë të centrifugimit të tubit bosh sipas udhëzimeve.
5. Ndotje të tjera me papastërti.
Analiza: Mostrat e ruajtura ose mostrat speciale nuk janë paratrajtuar.
Rekomandim: Trajtoni plotësisht kampionin sipas udhëzimeve.
