Udhëzues për analizën e problemit

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Rendiment i ulët ose pa ADN

Zakonisht ka shumë faktorë që ndikojnë në rendimentin e ADN-së gjenomike, duke përfshirë burimin e kampionit, moshën e kampionit, kushtet e ruajtjes së kampionit dhe funksionimin.

ADN gjenomike nuk mund të fitohej gjatë ekstraktimit

1. Mostrat e indeve nuk ruhen në mënyrë të duhur ose ruhen për një kohë të gjatë, duke rezultuar në degradimin e ADN-së gjenomike.

Rekomandim: Mbani mostrat e indeve në azot të lëngshëm ose -20°C;përpiquni të përdorni mostrat e mbledhura rishtazi për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.

2. Sasia shumë e vogël e mostrës mund të bëjë që ADN-ja gjenomike përkatëse të mos nxirret.

Sugjerim: Për mostrat e indeve që janë ruajtur për një kohë të gjatë ose kanë degradim të rëndë të ADN-së gjenomike, sasia e mostrave të indeve mund të rritet në mënyrë të përshtatshme për të nxjerrë një ADN të konsiderueshme gjenomike.Sasia e kampionit mund të përcaktohet sipas nevojave të ADN-së, por mostra e freskët nuk duhet të kalojë 100 mg, dhe mostra e thatë nuk duhet të kalojë 30 mg.

3. Mostra nuk bluhet me azot të lëngshëm ose nuk vendoset për një kohë të gjatë pas azotit të lëngët.

Sugjerim: Gjatë nxjerrjes së ADN-së, mostra duhet të bluhet plotësisht me azot të lëngshëm për të thyer murin qelizor;pas bluarjes, ju lutemi transferoni pluhurin e mostrës në PL1 të parangrohur në 65°C sa më shpejt që të jetë e mundur (pasi pluhuri i bluar të shkrihet, ADN-ja gjenomike do të fillojë të degradohet me shpejtësi).

4. Ruajtja jo e duhur e Foregene Protease rezulton në aktivitet të reduktuar ose të çaktivizuar.

Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes së Foregene Protease ose zëvendësoni atë me një Foregene Proteazë të re për hidrolizë enzimatike.

5. Kompleti nuk ruhet në mënyrë të duhur ose ruhet për një kohë të gjatë, duke shkaktuar dështimin e disa komponentëve në komplet.

Rekomandim: Bleni një komplet të ri për nxjerrjen e ADN-së gjenomike të bimëve për operacionet përkatëse.

6. Përdorimi jo i duhur i kompletit.

Sugjerim: Bleni një Kit për izolimin e ADN-së së bimëve të dedikuar për mostrat për nxjerrjen dhe pastrimin e ADN-së gjenomike të bimëve.

7. Bufer WB pa shtuar anhydrous etanol.

Rekomandim: Sigurohuni që të shtoni volumin e saktë të etanolit absolut në Buffer WB.

8. Eluenti nuk u pikua në mënyrë korrekte në membranën silicore.

Sugjerim: Shtoni eluentin e parangrohur në 65℃me pika në mes të membranës së xhelit të silicës dhe lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.

Ekstraktimi për të marrë ADN gjenomike me rendiment të ulët

1. Mostra ruhet në mënyrë jo të duhur ose ruhet për një kohë të gjatë, duke rezultuar në degradimin e ADN-së gjenomike.

Rekomandim: Ruani mostrat e indeve në -20℃;përpiquni të përdorni mostrat e indeve të mbledhura rishtazi për nxjerrjen e ADN-së gjenomike.

2. Nëse sasia e mostrave të indeve është shumë e vogël, ADN-ja gjenomike e nxjerrë do të jetë më e vogël.

Sugjerim: Disa mostra bimore janë të pasura me ujë, si p.sh. bimët ujore si algat etj., doza mund të rritet siç duhet ose uji mund të dehidrohet pak para operacionit.

3. Mostrat nuk janë bluar plotësisht me azot të lëngshëm ose janë lënë në temperaturën e dhomës për një kohë të gjatë pas bluarjes.

Sugjerim: Bluarja e azotit të lëngët duhet të jetë e mjaftueshme dhe muri i qelizës së mostrës duhet të thyhet sa më shumë që të jetë e mundur;menjëherë pas bluarjes, pluhuri i mostrës duhet të transferohet në 65℃Buffer PL1 i parangrohur për hapin tjetër.

4. Mospërdorimi i kompletit të duhur.

Rekomandim: Përdorni një komplet të dedikuar për izolimin e ADN-së së bimëve për të nxjerrë dhe pastruar ADN-në gjenomike të bimëve.

5. Ruajtja jo e duhur e Foregene Protease rezulton në aktivitet të reduktuar ose të çaktivizuar.

Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes së Foregene Protease ose zëvendësoni atë me një Foregene Proteazë të re për hidrolizë enzimatike.

6. Problemi i eluentit

Rekomandim: Ju lutemi përdorni Buffer EB për elucionin;nëse përdorni ddH₂O ose eluentët e tjerë, sigurohuni që pH e eluentit të jetë midis 7.0-8.5.

7. Eluenti nuk piqet siç duhet

Sugjerim: Ju lutemi shtoni pikën e elucionit në mes të membranës silicë dhe lëreni në temperaturën e dhomës për 5 minuta për të rritur efikasitetin e elucionit.

8. Vëllimi i eluentit është shumë i vogël

Sugjerim: Ju lutemi përdorni eluentin për elucionin e ADN-së gjenomike sipas udhëzimeve, të paktën jo më pak se 100μl.

ADN gjenomike e nxjerrë me pastërti të ulët

Pastërtia e ulët e ADN-së gjenomike do të çojë në dështimin ose efektin e dobët të eksperimenteve në rrjedhën e poshtme, si p.sh.: enzima nuk mund të pritet dhe fragmenti i gjenit të synuar nuk mund të merret me PCR.

1. Ndotja e proteinave të ndryshme, kontaminimi me ARN.

Analiza: Buffer PW nuk është përdorur për të larë kolonën;Buffer PW nuk u përdor për të larë kolonën me shpejtësinë e duhur të centrifugimit.

Sugjerim: përpiquni të siguroheni që të mos ketë reshje në supernatant kur supernatanti kalon nëpër kolonë;sigurohuni që të lani kolonën e pastrimit me Buffer PW sipas udhëzimeve dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.

2. Ndotja e joneve papastërti.

Analiza: Kolona e larjes Buffer WB u hoq ose u la vetëm një herë, duke rezultuar në kontaminim jonik të mbetur.

Rekomandim: Sigurohuni që të lani dy herë me Buffer WB sipas udhëzimeve për të hequr sa më shumë jonet e mbetura.

3. Ndotja me RNase.

Analiza: RNaza ekzogjene i shtohet Buferit;Operacioni i gabuar i larjes në Buffer PW do të rezultojë në RNase të mbetur dhe do të ndikojë në operacionet eksperimentale të ARN-së në rrjedhën e poshtme, si transkriptimi in vitro.

Sugjerim: Kompletet e ekstraktimit të acidit nukleik të serisë Foregene mund të heqin ARN-në pa RNazë shtesë dhe të gjithë reagentët në Kit për izolimin e ADN-së së bimëve nuk kanë nevojë për RNase;sigurohuni që të lani kolonën e pastrimit me Buffer PW sipas udhëzimeve dhe ky hap nuk mund të anashkalohet.

4. Mbetjet e etanolit.

Analiza: Pas larjes së kolonës së pastrimit me Buffer WB, nuk u krye centrifugim me tub bosh.

Rekomandim: Ndiqni udhëzimet për centrifugimin e duhur të tubit bosh.

Manuali i udhëzimeve:

Manuali i Udhëzimit të Kompletit të Izolimit të ADN-së së bimëve