Kompleti RT-qPCR (96 pusi) QuickEasy Cell Direct – SYBR Green I
Përshkrimet
Të(96-pus) QuickEasyTM Kompleti Cell Direct RT-qPCR-SYBR Gjelbër Iofronnjë sistem unik tampon lysisto çliron shpejt ARNnga qeliza e kultivuarmostrat për reaksionet RT-qPCR, duke eliminuar kohë dhe mundimProcesi i pastrimit të ARN-së dhe merr vetëm 7 minuta për të marrë shabllonin e kërkuar të ARN-së.Të5× Përzierje e drejtpërdrejtë RTdhe2× Direct qPCR Mix-SYBRdhënë në kuti mund të shpejt dhetë marrë në mënyrë efektive sasiore në kohë realeRezultatet e PCR.
5× Direct RT Mix dhe 2× Direct qPCR Mix-SYBR kanë tolerancë të fortë ndaj frenuesit dhe mund të përdorin lizën e kampionit për t'u testuar si një shabllon për transkriptimin e kundërt efikas dhe amplifikimin specifik.Reagenti përmban transkriptazën e kundërt unike Foregene me afinitet të lartë për ARN, si dhe Hot D-Taq ADN Polimerazë, dNTPs, MgCl2 , tampon reaksioni, optimizues dhe stabilizues PCR, dhe mund të përdoret së bashku me tamponin e lizës për të zbuluar mostrën shpejt, lehtë dhe saktë, dhe ka karakteristikat e ndjeshmërisë së lartë, specifikës së fortë dhe stabilitetit të mirë.
Kompleti synon lizën e mikrosistemit të qelizave të kultivuara me 96 pus dhe ka uniformitet dhe konsistencë të mirë;komponentët e kompletit ofrojnë 96 reaksione lize, 96 reaksione të transkriptimit të kundërt dhe reaksione 96×2 qPCR, të cilat mund të plotësojnë pllakën e qelizave me 96 pus për përdorim një herë, duke shmangur ndotjen e shkaktuar nga hapja, ngrirja dhe shkrirja e përsëritur e reagentëve dhe degradimi i performancës së reagentëve.
Komponentët e kompletit
| Përbërja e kompletit ( 50 μSistemi i lizës L/20 μLRT sistemi i reaksionit /20μSistemi i reagimit L qPCR) | DRT-03011 | Vërejtje | |
| 96T | |||
| PjesëI | TamponCL | 5 ml | QelizëLiza |
| ForegeneProteaza Plus II | 100 μL | ||
| TamponST | 500 μL | ||
| Pjesë II | ADNGomë | 100 μL | |
| 5× Përzierje e drejtpërdrejtë RT | 400 μL | RT | |
| 2× Përzierje e drejtpërdrejtë qPCR-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| Bojë referimi 50× ROX | 400µL | ||
| RNase- FalasddH2 O | 1.7 ml |
| |
| Mvjetore | 1 copë | 1 porcion | |
*: Reagenti i lizës ADN Eraser përfshihet në Pjesën II të kompletit;Komponentët Cell Lysis, RT dhe qPCR mund të blihen veçmas.
Karakteristikat dhe avantazhet
■E thjeshtë dhe efektive: me teknologjinë Cell Direct RT, mostrat e ARN-së mund të merren në vetëm 7 minuta.
■ Kërkesa e mostrës është e vogël, deri në 10 qeliza mund të testohen.
■ Rezultat i lartë: mund të zbulojë shpejt ARN në qelizat e kultivuara në pllaka 384, 96, 24, 12, 6 pusesh.
■ Goma e ADN-së mund të heqë shpejt gjenomet e lëshuara, duke reduktuar shumë ndikimin në rezultatet e mëvonshme eksperimentale.
■ Sistemi i optimizuar RT dhe qPCR e bën transkriptimin e kundërt RT-PCR me dy hapa më efikas dhe PCR më specifik dhe më rezistent ndaj frenuesve të reaksionit RT-qPCR.
Aplikimi i kompletit
Fusha e aplikimit: qeliza të kultivuara.
- ARN e çliruar nga liza e mostrës: e zbatueshme vetëm për shabllonin RT-qPCR të këtij kompleti.
- Kompleti mund të përdoret për qëllimet e mëposhtme: analiza e shprehjes së gjeneve, verifikimi i efektit të heshtjes së gjeneve të ndërmjetësuara nga siRNA, shqyrtimi i barnave, etj.
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
Pjesa I e këtij kompleti duhet të ruhet në 4℃;Pjesa II duhet të ruhet në -20℃.
Foregene Protease Plus II duhet të ruhet në 4℃, mos ngrini në -20℃.
Reagenti 2×Direct qPCR Mix-Taqman duhet të ruhet në -20℃në padituri;nëse përdoret shpesh, mund të ruhet edhe në 4℃ për ruajtje afatshkurtër (përdoret brenda 10 ditëve).
Parimet e projektimit të primerit PCR në kohë reale
Forward Primer dhe Reverse Primer
Për PCR në kohë reale, dizajni i primerit është shumë i rëndësishëm.Primerët lidhen me specifikën dhe efikasitetin e amplifikimit PCR dhe mund të dizajnohen duke iu referuar parimeve të mëposhtme:
- Gjatësia e primerit: 18-30 bp.
- Përmbajtja GC: 40-60%.
- Vlera Tm: Softueri i projektimit të Primer, siç është Primer 5, mund të japë vlerën Tm të primerit.Vlerat e Tm të primerëve në rrjedhën e sipërme dhe të poshtme duhet të jenë sa më afër që të jetë e mundur.Formula e llogaritjes së Tm mund të përdoret gjithashtu: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Gjatë kryerjes së PCR, një temperaturë nën vlerën Tm të primerit prej 5 °C zgjidhet përgjithësisht si temperatura e pjekjes (rritja përkatëse në temperaturën e pjekjes mund të rrisë specifikën e reaksionit PCR).
- Primerë dhe produkte PCR:
- Gjatësia e produktit për amplifikimin e PCR të primerit të projektimit preferohet të jetë 100-150 bp.
- Abetaret e projektimit në zonën strukturore dytësore të shabllonit duhet të shmangen sa më shumë që të jetë e mundur.
- Shmangni formimin e 2 ose më shumë bazave plotësuese midis skajeve 3' të primerëve në rrjedhën e sipërme dhe të poshtme.
- Baza terminale e primerit 3' nuk mund të jetë e pranishme me 3 G ose C shtesë të njëpasnjëshme.
- Vetë primerët nuk mund të kenë struktura plotësuese, përndryshe do të krijohet një strukturë fije flokësh, e cila ndikon në amplifikimin e PCR.
- ATCG duhet të shpërndahet sa më në mënyrë të barabartë të jetë e mundur në sekuencën e primerit dhe baza e terminalit 3′ duhet të shmanget si T.
Shtojca1: Cell DirectRT-qPCR Komponenti i kompletitt paketë shtesë
1.Tretësira e lizës së qelizave
| Zgjidhja e lizës së qelizave | |||
| Komponentët e kompletit (Sistemi i lizës 24 pusi / pus) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PjesëI | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaza Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PjesëII | Gomë ADN-je | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Përzierje RT | |
| Komponentët e kompletit (Sistemi i reagimit 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Përzierje e drejtpërdrejtë RT | 800 μl |
| DdH pa RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| Përzierje qPCR | ||
| Komponentët e kompletit (Sistemi i reagimit 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Bojë referimi ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH pa RNase2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manualet e udhëzimeve:
