Kompleti i drejtpërdrejtë RT-qPCR II
Përshkrimi i kompletit:
◮Kompleti i drejtpërdrejtë RT-qPCR, duke përdorur Foreasy Reverse Transcriptase dhe Foreasy HS Taq DNA Polymerase të zhvilluara nga Foregene, me tampon reaksioni unik, e bën këtë komplet me rezistencë dhe pajtueshmëri të fortë dhe mund të testojë drejtpërdrejt reagimin duke përdorur sistemin Foregene Lysis si shabllon.Ky komplet mund të aplikohet për kompletin e zbulimit të acidit nukleik COVID-19 dhe zhvillimin e kompletit të zbulimit të acidit nukleik të baktereve të tjera patogjene.
Përshkrim
Kompleti i drejtpërdrejtë RT-qPCR ofron bufer RT-qPCR të paketuar veçmas, polimerazë ADN Foreasy HS Taq me efikasitet të lartëdhe Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),duke e bërë të përshtatshëm për krijimin e kompleteve të fundit dhe rregullimin e sistemit, brenda verifikimit të thjeshtë.
Kompleti i drejtpërdrejtë RT-qPCR, duke përdorur Foreasy Reverse Transcriptase dhe Foreasy HS Taq DNA Polymerase të zhvilluara nga Foregene, me tampon reaksioni unik, e bën këtë komplet me rezistencë dhe pajtueshmëri të fortë dhe mund të testojë drejtpërdrejt reagimin duke përdorur sistemin Foregene Lysis si shabllon.Ky komplet mund të aplikohet për kompletin e zbulimit të acidit nukleik COVID-19 dhe zhvillimin e kompletit të zbulimit të acidit nukleik të baktereve të tjera patogjene.
Ky komplet mund të jetë drejtpërdrejt përbërësi i produktit IVD, duke u përdorur lehtë dhe shpejt.Ajo ka nevojë vetëm për verifikim të lehtë, pa u zhvilluar përsëri.
Specifikimet
500 T, 50,000 T
Komponentët e kompletit
| Përmbajtja e kompletit (Sistemi i reagimit 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50,000 T | |
| Foreasy Reverse Transkriptaza (200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 ml× 5 |
| Foreasy HS Taq ADN Polimeraza (5 U/μL) | 100 μL× 1 | 1 ml× 10 |
| 2× RT-qPCR direkteTampon | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Udhëzim | 1 | 1 |
Hapat operativ
Përgjigje: Përgatitni shabllonin dhe reagentin
1. Përgatitni shabllonin e përgatitur të ARN-së (Rekomandohet përdorimi i kompletit të serisë së Foregene Total RNA Isolation Kit për nxjerrjen dhe pastrimin e shabllonit të ARN-së) ose produktin për krisjen e mostrës (Rekomandohet përdorimi i sistemit Foregene Lysis), primerët specifikë (10 μM) dhe materiale të tjera harxhuese, instrument.
2. Vendoseni buferin 2× Direct RT-qPCR, ddH2O pa RNase dhe Bojën Referenciale 20× ROX (nëse është e nevojshme) në kutinë me akull, duke i bërë këto të shkrihen në mënyrë natyrale dhe të përzihen butësisht.
B: Përgatitja e sistemit RT-qPCR
Merrni gjysmën e vëllimit të tamponit të reaksionit të sistemit të reaksionit (për shembull, nëse vëllimi i sistemit është 20 μL, ai duhet të marrë 10 μL 2× Bufer direkt RT-qPCR). Përsasinë përkatëse të enzimës, ne sugjerojmë qëM-MLV: Sistemi i reagimit 10-30 U/20 μL,TaqADN polimeraza：Sistemi i reagimit 1-2 U/20 μLky është sugjerimi ynë, duhet ta provoni dhe ta rregulloni), shtoni shabllonin e ARN-së, primerët dhe sondat specifike dhe shtoni ddH pa RNase2O deri në 20 μL.Përgatitja specifike e sistemit të reaksionit RT-qPCR mund të referohet në tabelën e mëposhtme 1.
Tabela 1: Përgatitja e sistemit RT-qPCR
| Komponenti | Vëllimi | Përqendrimi përfundimtar |
| 2× Buffer direkt RT-qPCR | 10 μL | 1× |
| Transkriptaza e kundërt Foreasy (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ADN Polimeraza | 1-2 U | |
| Primer përpara (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Primer i kundërt (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Shablloni (ARN ose Lizatë) | X μL | |
| 20× Bojë referimi ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Vëllimi i përgjithshëm | 20 μL |
Shënim: Forward Primer dhe Reverse Primer janë primerë specifikë të gjenit të synuar.Sistemi i qPCR mund të rregullohet sipas modeleve praktike eksperimentale dhe PCR.Ne rekomandojmë 400nM për përqendrimin përfundimtar të shumicës së abetareve.Rregulloni volumin e primerëve dhe sondave specifike sipas përqendrimit të përgatitur dhe përqendrimit përfundimtar të rekomanduar, ju lutem.
1*: Zgjidhni përqendrimin përfundimtar të përshtatshëm të Bojës Referenciale ROX sipas instrumenteve të ndryshme sasiore PCR.Përqendrimi optimal i ngjyrës referencë ROX të instrumenteve të zakonshme sasiore PCR tregohet në tabelën e mëposhtme:
| Instrumentet sasiore PCR | Përqendrimi përfundimtar i bojës referuese ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Hapi i parë,etj. | 1× (për shembull, shtoni 1μl 20×ROX ngjyrë referimi në sistemin e reagimit 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P dhe Mx4000, etj. | 0,5× (për shembull, shtoni 0,5μl 20×ROX Bojë Referenciale në sistemin e reagimit 20 μL) |
| Instrumenti Roche PCR, instrumenti Bio-Rad PCR, instrumenti PCR sasior Eppendorf, etj. | Pa Bojë Reference ROX |
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
Kompleti duhet të ruhet në -20 ± 5℃.Duhet të ruhet menjëherë në frigorifer termostatik -20℃.Periudha e vlefshmërisë është 2 vjet nëse ruhet në gjendje të përshtatshme.
