Kompleti ForeDirect RT-qPCR
Përshkrimi i kompletit:
◮Për amplifikimin e drejtpërdrejtë të ARN-së në kohë reale nga koleksionet e shtupës pa procese të pastrimit të ARN-së.Ky komplet përfundon ciklet qRT-PCR brenda një ore.Përzierja e enzimës është një përzierje e optimizuar e transkriptazës së kundërt, polimerazës së ADN-së Hot-Start Taq, frenuesit RNase.Buferi i Reaksionit përmban të gjithë komponentët e kërkuar, duke përfshirë komponentët e optimizuar të tamponit, Mg2+, dUTP dhe dNTP.
Përshkrim
Kompleti ForeDirect RT-qPCR është projektuar për amplifikimin e drejtpërdrejtë të ARN-së në kohë reale nga koleksionet e shtupave pa procese të pastrimit të ARN-së.Ky komplet përfundon ciklet qRT-PCR brenda një ore.Përzierja e enzimës është një përzierje e optimizuar e transkriptazës së kundërt, polimerazës së ADN-së Hot-Start Taq, frenuesit RNase.Buferi i Reaksionit përmban të gjithë komponentët e kërkuar, duke përfshirë komponentët e optimizuar të tamponit, Mg2+, dUTP dhe dNTP.
Specifikimet
100 T
Komponentët e kompletit
| Agjent çlirues i acidit nukleik |
| Mbrojtës i ARN-së |
| 2× RT-qPCR Buffer |
| Përzierje enzimash (Taq&M-MLV) |
| Udhëzimet |
Aplikimi PCR
1. Pasi tubat e reaksionit PCR të jenë centrifuguar shkurtimisht, vendosini ato në rezervuarin e mostrës së instrumentit përforcues.
2. Protokolli termik
| Hapi | Temperatura | Koha | Ciklet | |
| 1 | Transkriptimi i kundërt | 50 ℃ | 15 min | 1 |
| 2 | Para-denatyrimi | 95 ℃ | 1 min | 1 |
| 3 | Denatyrimi | 95 ℃ | 10 sekonda | 42 |
| 4 | Pjekja/Zgjatja | 60 ℃ | 30 sekonda | |
Shënim:Sinjali fluoreshent u zbulua menjëherë pas hapit të zgjatjes së çdo cikli.
3. Pas vendosjes, ruani skedarin dhe ekzekutoni programin e reagimit.
Hapat operativ
Përpara përgatitjes së reagentit, të gjithë reagentët në komplet duhet të shkrihen në temperaturën e dhomës dhe të përzihen butësisht.
Përgatitja e reagentit
1. Përgatitni përzierjen e çlirimit të acidit nukleik
| Komponenti | Vëllimi për mostër ose kontroll |
| Agjent çlirues i acidit nukleik | 5 μL |
| Mbrojtës i ARN-së | 0,5 μL |
2. Përgatitni përzierjen e reagimit
| Komponenti | Vëllimi për mostër ose kontroll |
| 2× RT-qPCR Buffer | 15 μL |
| Përzierje enzimash (Taq&M-MLV) | 1,5 μL |
| Abetare dhe sonda | 1 μL |
Ruajtja dhe afati i ruajtjes
-Kit duhet të ruhet në -20± 5℃.Periudha e vlefshmërisë është 12 muaj.
-Shmangni ciklet e përsëritura të ngrirje-shkrirjes (<5 cikle).
