Nuk ka sinjale përforcuese

1. Taq ADN Polimeraza në komplet humbet aktivitetin e saj për shkak të ruajtjes së gabuar ose skadimit të kompletit.
Rekomandim: Konfirmoni kushtet e ruajtjes së kompletit;rishtoni një sasi të përshtatshme të Taq DNA Polimerazës në sistemin PCR ose blini një Kit të ri PCR në kohë reale për eksperimentet përkatëse.

2. Ka shumë frenues të Taq ADN Polimerazës në shabllonin e ADN-së.
Sugjerim: Ripastroni shabllonin ose zvogëloni sasinë e shabllonit të përdorur.

3. Përqendrimi i Mg2+ nuk është i përshtatshëm.
Rekomandim: Përqendrimi i Mg2+ i përzierjes 2× Real PCR që ne ofrojmë është 3.5 mM.Megjithatë, për disa primerë dhe shabllone të veçantë, përqendrimi i Mg2+ mund të jetë më i lartë.Prandaj, mund të shtoni direkt MgCl2 për të optimizuar përqendrimin e Mg2+.Rekomandohet të rritet Mg2+ 0.5mM çdo herë për optimizim.

4. Kushtet e amplifikimit të PCR nuk janë të përshtatshme dhe sekuenca e primerit ose përqendrimi është i papërshtatshëm.
Sugjerim: konfirmoni korrektësinë e sekuencës së primerit dhe abetarja nuk është degraduar;nëse sinjali i amplifikimit nuk është i mirë, përpiquni të ulni temperaturën e pjekjes dhe rregulloni përqendrimin e primerit në mënyrë të përshtatshme.

5. Sasia e shabllonit është shumë e vogël ose shumë.
Rekomandim: Kryeni hollimin e gradientit të linearizimit të shabllonit dhe zgjidhni përqendrimin e shabllonit me efektin më të mirë PCR për eksperimentin PCR në kohë reale.

NTC ka vlerë shumë të lartë fluoreshence

1.Ndotja me reagent të shkaktuar gjatë operimit.
Rekomandim: Zëvendësoni me reagentë të rinj për eksperimentet PCR në kohë reale.

2.Kontaminimi ka ndodhur gjatë përgatitjes së sistemit të reagimit PCR.
Rekomandim: Merrni masat e nevojshme mbrojtëse gjatë funksionimit, si: mbajtja e dorezave latex, përdorimi i një maje pipete me filtër, etj.

3. Primerët janë të degraduar, dhe degradimi i primerëve do të shkaktojë amplifikimin jo specifik.
Sugjerim: Përdorni elektroforezën SDS-PAGE për të zbuluar nëse primerët janë të degraduar dhe zëvendësoni ato me primerë të rinj për eksperimentet PCR në kohë reale.

Dimer primer ose amplifikim jo specifik

1. Përqendrimi i Mg2+ nuk është i përshtatshëm.
Rekomandim: Përqendrimi i Mg2+ i përzierjes 2× Real PCR EasyTM që ne ofrojmë është 3,5 mM.Megjithatë, për disa primerë dhe shabllone të veçantë, përqendrimi i Mg2+ mund të jetë më i lartë.Prandaj, mund të shtoni direkt MgCl2 për të optimizuar përqendrimin e Mg2+.Rekomandohet të rritet Mg2+ 0.5mM çdo herë për optimizim.

2. Temperatura e pjekjes PCR është shumë e ulët.
Sugjerim: Rriteni temperaturën e pjekjes PCR me 1℃ ose 2℃ çdo herë.

3. Produkti PCR është shumë i gjatë.
Rekomandim: Gjatësia e produktit të PCR në kohë reale duhet të jetë ndërmjet 100-150 bp, jo më shumë se 500 bp.

4. Primerët janë të degraduar, dhe degradimi i primerëve do të çojë në shfaqjen e amplifikimit specifik.
Sugjerim: Përdorni elektroforezën SDS-PAGE për të zbuluar nëse primerët janë të degraduar dhe zëvendësoni ato me primerë të rinj për eksperimentet PCR në kohë reale.

5. Sistemi PCR është i papërshtatshëm, ose sistemi është shumë i vogël.
Sugjerim: Sistemi i reagimit PCR është shumë i vogël do të bëjë që saktësia e zbulimit të ulet.Është më mirë të përdoret sistemi i reagimit i rekomanduar nga instrumenti sasior PCR për të rifilluar eksperimentin PCR në kohë reale.

Përsëritshmëri e dobët e vlerave sasiore

1. Instrumenti nuk funksionon.
Sugjerim: Mund të ketë gabime midis çdo vrime PCR të instrumentit, duke rezultuar në riprodhueshmëri të dobët gjatë menaxhimit ose zbulimit të temperaturës.Ju lutemi kontrolloni sipas udhëzimeve të instrumentit përkatës.

2. Pastërtia e mostrës nuk është e mirë.
Rekomandim: Mostrat e papastër do të çojnë në riprodhueshmëri të dobët të eksperimentit, i cili përfshin pastërtinë e shabllonit dhe abetareve.Është më mirë të ripastroni shabllonin dhe primerët pastrohen më mirë nga SDS-PAGE.

3. Koha e përgatitjes dhe ruajtjes së sistemit PCR është shumë e gjatë.
Sugjerim: Përdorni sistemin PCR në kohë reale për eksperimentin PCR menjëherë pas përgatitjes dhe mos e lini mënjanë për shumë gjatë.

4. Kushtet e amplifikimit të PCR nuk janë të përshtatshme dhe sekuenca e primerit ose përqendrimi është i papërshtatshëm.
Sugjerim: konfirmoni korrektësinë e sekuencës së primerit dhe abetarja nuk është degraduar;nëse sinjali i amplifikimit nuk është i mirë, përpiquni të ulni temperaturën e pjekjes dhe rregulloni përqendrimin e primerit në mënyrë të përshtatshme.

5. Sistemi PCR është i papërshtatshëm, ose sistemi është shumë i vogël.
Sugjerim: Sistemi i reagimit PCR është shumë i vogël do të bëjë që saktësia e zbulimit të ulet.Është më mirë të përdoret sistemi i reagimit i rekomanduar nga instrumenti sasior PCR për të rifilluar eksperimentin PCR në kohë reale.